样品提纯教案分析.pptVIP

柱层析 根据被分离组分对固定相（硅胶）吸附能力的差异，以及洗脱剂（PE:EA)洗脱能力的差异来进行分离的 选择洗脱剂 让所要的点在板的1/3到1/2之间，比如这种情况，一般的洗脱剂选择是:先用少量10:1与5:1的,主要用3:1的过，若第二个点出来后，可接着用2:1或1:1的过。 PE:EA=3:1 S M P 柱层析过程 洗涤，吹干 装硅胶，敲平 润柱子 制样，上样， 压样，加洗脱剂 加压，接试管 点板，收集旋干 洗涤，吹干 一般用乙醇洗涤。吹干。垂直架在铁架台上。 装硅胶，敲平 装硅胶时，抽气，敲实，倒硅胶同时进行。敲打时要敲击柱子正面，否则会把柱子敲弯。装一定高度后，敲平表面。 *重要事项：装柱一定要在抽风良好的通风橱中进行，并带好口罩，以防吸入过多的硅胶或氧化铝粉尘而对身体产生致命伤害。 润柱子 沿柱子内壁加入石油醚，要防止把硅胶表面冲出坑。石油醚高出硅胶表面一定高度后，渐渐放出液体，至溶剂液面和硅胶层表面相齐。 上样 液体上样：把要分离的试样配制成适当浓度的溶液。将硅胶上多余的溶剂放出，直到柱内液体表面到达表面时，停止放出溶剂。用干净的滴管沿管壁加入试样溶液，注意不要使溶液把硅胶层冲松浮起，试祥溶液加完后，开启下端旋塞，使液体渐渐放出，至溶剂液面和硅胶层表面相齐。 固体上样：当待分离样品为固体时不能直接上样，一般采用拌硅胶上样法。将固体样品溶于溶剂中，加入一定量的粗硅胶，充分摇匀，然后旋干溶剂，得到的细粉状固体后小心倒入准备好的层析柱中，并敲平表面。 压样，加洗脱剂 压样：上样后加入一层石英砂以防加入洗脱剂破坏其表面。 链接溶剂球，用卡子卡住，否则加压时会蹦开。 加压，接试管 在洗脱和分离的过程中，应当注意以下几点： 1、继续不断地加入洗脱剂，应保持一定高度的液面，在整个操作中勿使硅胶层表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，易使硅胶柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。 2、控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。 3、由于硅胶表面活性较大且显弱酸性，有时可能促使某些成分破坏，所以应尽量在一定时间内完成一个柱色谱的分离，以免试样在柱上停留的时间过长，发生变化或扩散而影响分离效果 点板，收集旋干 将所接试管依次点板，将相同点的试管倒入烧瓶中，旋干，转移，称重。这样就达到了分离的效果。 选择 柱子的选择 柱子尺寸的选择：根据被分离物质的多少来选择柱子的粗细，量多选择的柱子越粗。 硅胶高度的选择：根据被分离组分的多少以及点在板上的分布情况，一般量多装的高，点在板上分离的不明显装的越高 洗脱剂的选择 通过爬板来选择洗脱剂的极性，选择的洗脱剂的极性要使所要的点在板的1/3到1/2之间，刚开始加的洗脱剂要低于这个极性。然后 慢慢提高到此极性。 选择洗脱溶剂种类时应考虑到被分离各物质的极性和溶解度。非极性化合物用非极性溶剂，而极性溶剂对于洗脱极性化合物是有效的。被分离各物质应在洗脱溶剂中有非常好的溶解性，否则会严重影响分离效果。单一溶剂往往不能达到有效的分离，通常可以选用混合溶剂作洗脱剂。 常用石油醚陪乙酸乙酯，二氯甲烷陪甲醇。 注意事项 1、继续不断地加入洗脱剂，应保持一定高度的液面，在整个操作中勿使硅胶层表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，易使硅胶柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。 2、控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。 3、由于硅胶表面活性较大且显弱酸性，有时可能促使某些成分破坏，所以应尽量在一定时间内完成一个柱色谱的分离，以免试样在柱上停留的时间过长，发生变化或扩散而影响分离效果 爬板 用铅笔在层析板上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样。 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展缸中，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，通过样品组分固移动速度不同而彼此分离。 通过不断的尝试来选择最佳的展开剂配比。 可以通过爬板来判断反应原料有没有反应消耗， 有没有新物质生成，以及大致判断反应进程。 斑点的检出 展开后的薄层板，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。紫外光灯的功率越大，暗室越暗，检出效果就越好。立刻用铅笔标出紫外灯下显出的斑点。 若点样太浓，易造成斑点太大，相互交叉或拖尾，不能达到很好的分离效果。 若点样太稀，不易比较斑点的位置。 若斑点拖尾，酸性物质加酸，碱性物质加碱。（可以尝试，但不一定管用） 重结晶 重结晶的原理是利用混合物中各组分在某种溶剂中的溶解度不同，而使它们互相分离。 它可用于固体物质（一般1克以上）的分离、纯化处理。 一般步骤 选择适宜的溶剂； 将粗产品溶于适宜的热的溶液中制成饱和溶液； 乘热过滤除去不溶性杂质。如溶液的颜色深