第节动物细胞培养生物制药精要.ppt

先看看人体的一些细胞 免疫细胞 树突细胞 骨细胞 成骨细胞 胶质细胞 视网膜视杆细胞 黑色素细胞 上皮型细胞 2 培养板培养法（微量培养法） 现代体外培养技术最为常用的方法之一。 基本要点：将培养细胞接种在培养板的孔内，然后在CO2培养箱内培养。常用的培养板有6孔、24孔、96孔培养板。 3 灌注小室培养法 1912年由伯罗设计了一种简单的灌注小室培养模型。 基本要点：将细胞接种于一个由上下两个盖玻片（分别构成上壁与下壁）与一金属圈（构成侧壁）密封围成的小室内，保持在一定条件下培养。在小室的侧面分别有液体流入和流出的开口，供新鲜培养液流入和旧培养液排出。 显著特点：营养液可以循环供应 三 动物细胞的低温保存 微载体分类 1.实心微载体 优点：易于细胞在表面贴壁，机械强度高， 容易接种操作 缺点：细胞浓度低；细胞容易受剪切力、搅 拌、碰撞等影响；细胞易老化脱落。 2.多孔微载体 优点：比表面积更大，使细胞免受机械损伤， 得到的细胞浓度高，可降低血清用量，可以 采用高的搅拌速度和通气量 缺点：容易产生营养传递障碍，积聚代谢副 产物。 课后视频：动物细胞培养技术: /v_show/id_co00XOTE5MDQzMg==.html 补充阅读文献： 第四篇 生物制品生产 第11章 动物细胞培养生物制药II 本节主要内容 1.适合大规模培养的细胞系 2.动物细胞培养的生物反应器 3.微载体及其培养特点 4.动物细胞培养的影响因素与培养工艺 本节关键问题 1.了解常用的大规模培养的动物细胞株特点 2.了解适合动物细胞大规模培养的生物反应器 3.重点掌握微载体培养技术 4.了解动物细胞培养的影响因素及灌注培养工艺 一 适合大规模培养的细胞株 1.细胞系(Cell line) 是由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细 胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群 体。第一次传代培养后的细胞即称之为细胞系。 不能连续培养的为有限细胞系(Finite cell line)， 能连续培养下去的为连续细胞系(Infinite cell line)。 2.细胞株(Cell strain) 是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分 离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的 细胞群，称细胞株。 细胞株的建立需要从细胞系群体中分离出一个细 胞，并使其在体外繁殖成为新细胞群体。 毛细管法 ------形成单个细胞克隆的细胞群体 有限稀释法 3.适合工业化生产的细胞株 包括： 原代细胞、传代细胞 有限细胞系、无限细胞系（不具有接触抑制现象；理 想的药物生产细胞） 二倍体细胞、异倍体细胞 融合细胞、转化细胞、基因工程细胞 贴壁型、非贴壁型 （1）原代细胞 鸡胚细胞、原代兔肾细胞或鼠肾细胞、血液淋巴 细胞 1949年，恩德斯（Enders）利用人胚胎组织细胞 生产脊髓灰质灭活疫苗，开创了动物细胞培养进 行生物制药的先河。 具有需要大量动物组织、成本高、费时费力等缺 点。 药物筛选、药理研究。 （2）传代细胞 二倍体细胞：具有正常细胞的特点：二倍体染色体、 具有贴壁和接触抑制特性、无致瘤性。 有限细胞 系（传代次数一般都不超过50代）。 WI-38： 1961年Wister研究所从女性高加索人 的正常胚肺组织中获得的一株人2倍体细胞系WI- 38。培增时间24h；贴壁生长；第一批获得批准用 于生产的二倍体细胞有对病毒敏感，第一个用于疫 苗（脊髓灰质灭活疫苗）生产。 MRC-5：二倍体，成纤维，生长比WI-38快。 （ 3）转化细胞 细胞转化是指细胞发生遗传改变而产生永生化， 即由限定性细胞系转化为连续性细胞系，可以在 体外进行无限传代和生长繁殖。 倍增时间短，对培养条件与生长因子要求低。 由于转化细胞常常由于染色体断裂而变成异倍体， 失去正常细胞的特点，开始时由于安全性不能确 认而没有大量使用。随着对肿瘤发生机制等研究 的深入，转化细胞于20世纪80年代获得批准用于 生产。 转化方法 1.细胞自转化 体外培养的细胞自发出现的转化现象。这种现象 在许多正常二倍体长期传代过程中出现。可能的 因素包括：血清质量、温度或pH不稳定、病毒污 染等。 2.人工诱发转化 采用诱导剂使正常细胞发生转化。凡是可以改变 DNA结构的因素都可以称为诱导剂，包括化学、 物理和病毒诱导剂。 CHO细胞(Chinese hamster ovary cell)：从中国 仓鼠卵巢分离的细胞，亚二倍体，有多种突变株。 贴壁生长，也可以悬浮培养，对剪切力和渗透压 改变有较高的忍受能力。 CHO细胞能表达糖基化蛋白药物：组织纤维蛋白 溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator， tPA)、促红细胞生成素（Erythropoief