细胞生物学实验-细胞融合.ppt

单克隆抗体的应用 主要用于疾病的诊断、治疗和预防。与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的优点。如；各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识别“自己”与“异己”，一旦发现 致病因素便与之结合将其杀死。 若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞 美国科学家采用细胞融合技术将番茄和马铃薯的细胞融合在一起，培育出称之为“番茄薯”或“薯番茄”的新型植物。植株地上部结番茄，地下部生长根茎，产量高，品质好。 动物细胞融合与单克隆抗体思考与探究 1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。 B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖 骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。 因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 3已成功的动物细胞融合实例还有哪些？ 生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌—鸡 原生质体— 血红细胞 1975年 人—胡萝卜 腹水癌细胞—原生质体 1976年 人—小鼠 纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞1978年 4.为什么不用两个而用多个细胞进行细胞融合？ 就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。 仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 5. 杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 这样的人畜细胞融合会造成什么后果？　　4位专家分析指出： 首先，某些目前未知的兔子疾病将传染给人类，就像艾滋病病毒可能是从非洲猩猩而来。 尽管中山医科大学把胚胎用于治疗性克隆研究，但万一被居心叵测者植人人类子宫，就可能产生一个人兔杂交种。“这完全是对人类尊严的亵读。” 精子和卵子受精 肌管 破骨细胞是由好几个细胞融合 巨 细 胞 骨巨细胞瘤 骨巨细胞瘤绿色箭头所指为正在融合的间质细胞 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 附录：蟾蜍血红细胞\鸡血红细胞 [实验步骤] 1.试剂： (1)Alsver液：葡萄糖2.05 g，柠檬酸钠 0.8 g，氯化钠0.42 g，加重蒸水至100 mL 即可。 (2)GKN液：氯化钠8 g，氯化钾0.4 g， 磷酸氢二钠1.77g，磷酸二氢钠0.69g，葡萄糖2 g，酚红0.01 g，溶于1000mL重蒸水中。 (3)Ringer溶液：二氯化钠0.25g，氯化钾 0.42g，氯化钠6.5g(恒温动物9g)溶于1000 mL蒸馏水中。 (4)