2013-基因一级结构分析要点.pptVIP

Thank you 目录 目录 基因一级结构解析技术 人类的多种疾病都与基因的结构或功能异常有关，因此，要阐明疾病发生的分子机制和进行有效的诊断与防治，均需首先揭示基因的结构与功能。 基因的一级结构是指脱氧核苷酸的排列顺序，解析一级结构最精确的技术就是DNA测序（DNA sequencing）。 一、 双脱氧法和化学降解法 Sanger双脱氧测序（dideoxy sequencing）法 Maxam-Gilbert化学降解测序法 化学反应可设有4组独立的反应：G反应（在G 残基上的裂解）、A+G反应（在嘌呤残基上的裂解）、C+T反应（在嘧啶残基上的裂解）、C反应（在C残基上的裂解）。 二、 全自动荧光DNA测序技术 1. 单色荧光法： 采用单一荧光染料标记引物5′-端或dNTP，所有产物的5′-末端均带上了同一种荧光标记，一个样品的四个反应必须分别进行，相应产物也必须在四个不同的泳道内电泳 2. 四色荧光法： 采用四种不同的荧光染料标记同一引物或4种不同的终止底物ddNTP，最终结果均相当于赋予DNA片段4种不同的颜色。因此，一个样品的4个反应产物可在同一个泳道内电泳。 三、 焦磷酸测序 焦磷酸测序是一种基于聚合原理的DNA测序（确定DNA中核苷酸的顺序）方法。它与桑格法（Sanger）不同，依赖于核苷酸掺入中焦磷酸盐的释放，而非双脱