STP-VD-9401-01头孢克肟分散片微生物限度验证方案9401-01.docVIP

头孢克肟分散片 微生物限度检查法验证方案 规格：0.1g 文件编号： 批准日期： ： 1.验证方案的起草 验证方案名称 验证编号 头孢克肟分散片微生物限度检查法验证方案 STP-VD-9401-01 起草人 部门 起草日期 ? ? 2.验证方案的审核 审核人 部门 审核日期 ? ? 3.验证方案的批准 批准人 部门 批准日期 验证小组成员名单 组 长 姓名 职务/职称 部门 何锋 经理 质量部 成 员 姓名 职务/职称 部门 陈娆 QC主管 质量部 康清勇 QA主管 质量部 钟元芳 QC 质量部 头孢克肟分散片微生物限度检查验证方案目录 1．概述 2．目的 3．范围 4．验证程序 5．再验证 6．结果评价及最终结论 1．概述 本品为头孢类口服固体制剂，细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证选用薄膜过滤法。控制菌检查方法的验证选用薄膜过滤法，主要为大肠埃希菌检查法的验证。阳性菌对照选用相应的大肠埃希菌，阴性菌对照选用金黄色葡萄球菌。 2．目的 确认所采用的方法适合于头孢克肟分散片的微生物限度检查微生物限度检查 胆盐乳糖发酵培养基 营养肉汤培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 曙红亚甲蓝琼脂培养基 MUG培养基 4.2 验证试验用菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44 102] 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26 003] 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63 501] 白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98 001] 黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98 003] 以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供，并且不超过5代。 4.3 方法：按《中国药典》2005年版二部微生物限度检查进行验证实验。 4.3.1菌液制备： 4.3.1.1 取经30～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1ml加0.9%氯化钠溶液9ml，10倍系列稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。 4.3.1.2 取经23～28℃培养24～48小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加0.9%氯 化钠溶液9ml，10倍系列稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数 备用。 4.3.1.3 取经23～28℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加入3～5ml0.9%氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸取出菌液，然后取1ml加0.9%氯化钠溶液9ml，10倍系列稀释为 10-4～10-5，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用（见附表一）。 4.3.2 供试品溶液的制备： 取供试品10g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，溶解，制成1：10的溶液，作为供试液。 4.3.3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证： 4.3.3.1 薄膜过滤法：取规定量供试液，过滤，冲洗，再最后一次冲洗液中加入试验菌50～100个/ml，过滤。取出滤膜，置培养基中培养，规定温度培养24～72小时，观察计数。 4.3.3.2 试验组:取供试液1ml，过滤，冲洗，在最后一次冲洗液中加入50～100个试验菌，作2个皿/菌株，取出滤膜，置培养基中培养24～72小时观察计数。 4.3.3.3 活菌组：测定每一菌株的试验菌数，1ml/皿，作2个皿/菌株。 4.3.3.4供试品对照组 ： 测定供试品本底菌落数，取供试液1ml，过滤，冲洗，取出滤膜，置培养基中培养24~72小时，观察计数，作2个皿/菌株。 4.3.3.5试验结果(见附表二)。 4.3.3.6结果判断 4.3.3.6.1验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 回收率(%)=×100% 4.3.3.6.2细菌计数方法与霉菌和酵母菌计数方法可以不一致。 4.3.3.6.3以上各试验菌的回收率均能达到70%以上的检测方法为准。 4.3.3.6.4若试验组的菌种回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%，按该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数。 4.3.3.6.5若任一次试验中