第8章紫外可见吸光光度法及分子荧光分析法解析：.ppt

第8章 紫外-可见吸光光度法及分子荧光分析法;化学分析：常量组分(1%), Er : 0.1% ～ 0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 ;仪器分析方法分类;分子光谱学 ;光声光谱法 (PAS) Photo Acoustic Spectroscopy 拉曼光谱法 (RS) Raman Spectroscopy 核磁共振波谱法(NMR) Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 质谱法 (MS) Mass Spectroscopy 发展联用技术是趋势!;8.1 吸光光度法的基本原理;I0;8.1.1 光的基本性质 电磁波的波粒二象性 ;X; h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34 J·s ?－频率 E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 1 eV = 1.602×10－19 J;结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越 长(频率越低)，光量子的能量越低. 单色光：具有相同能量(相同波长)的光. 混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在 一起. 例如白光.; 电磁波谱及分析方法;光学光谱区;8.1.2 物质对光的吸收与发射;S2;光谱种类;?/nm;熔融石英;Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱;苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱;不同物质吸收光谱的形状以及?max 不同 ——定性分析的基础 同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax 不同 ——定量分析的基础;8.1.3 光吸收基本定律:朗伯-比尔定律;朗伯-比尔定律;透光率(透射比）T（Transmittance）;吸光度A、透射比T与浓度c的关系;k 吸光系数 Absorptivity ;吸光度与光程的关系 A = abc ;吸光度与浓度的关系 A = abc;吸光度与波长的关系 A = abc;朗伯-比尔定律的适用条件;溶液浓度的测定;8.1.4 吸光度的加和性与吸光度的测量;8.2 光度分析的方法和仪器;2. 光电比色法; 滤光片;3. 吸光光度法和分光光度计;分光光度计的主要部件;氙灯;棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同.;在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600，1200，2400条/mm ) 利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.;吸收池(比色皿)：用于盛待测及参比溶液. 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 检测器：利用光电效应，将光能转换成电流讯号. 光电池，光电管，光电倍增管 检流计(指示器)： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录;硒光电池（Barrier-layer photocell）;光电管(Phototube);光电倍增管(Photomultiplier Tube, PMT);722型分光光度计;吸光光度法仪器主要差异比较;1. 单光束分光光度计;2. 双光束分光光度计;多通道仪器（Multichannel Instruments）;多通道二极管阵列分光光度计光路示意图;镀铝反射镜;纤维光度计;8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度; 2. Sandell(桑德尔)灵敏度 (S) 定义：截面积为1 cm2的液层在一定波长或波段处，测得吸光度为0.001时所含物质的量. 用S表示，单位：μg·cm-2 A= ? bc=0.001 bc ＝0.001/ ? ;例1: 邻二氮菲光度法测铁  ? (Fe) = 1.0 mg·L-1, b = 2 cm , A= 0.38  计算? 、S 和; c = 1.0 mg·L-1= 1.0×10-3 g /1000 mL = 1.0×10-4 g/100 mL;例2: 比较用以下两种方法测Fe的灵敏度.;8.3.2 准确度—仪器测量误差;测量误差公式推导:;10;8.4.1 显色剂与显色反应 ;有机显色剂;显色反应的选择 ;8.4.2 显色条件的确定;2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定）;邻二氮菲－亚铁反应完全度与pH的关系 ;pH3～8为适宜 的酸度范围;25℃;8.4.3 测定中的干扰以及消除方法;Co2+, Zn2+, Ni2+, Fe2+ ;2. 物理法—选择适当的测定波长; (1) 仅络合物有吸收，溶剂作参比. 如 phen-Fe2+ 标准曲线 (2) 待测液也