培养基的灭菌.docVIP

玻璃器皿的洗涤和包装玻璃器皿的洗涤和包装1. 玻璃器皿的洗刷：玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。锥形瓶、试管、 培养皿等浸入水中洗涤，用毛刷和洗衣粉洗刷，然后再用水冲净。移液管 先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后 备用。 2. 玻璃器皿灭菌前的准备工作： （1）培养皿又称双碟或平皿，由一底一盖组成一套。可以每套单独使用 纸包装，也可将几套一起用纸包装； （2）移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花（约1-1.5厘米 长）；以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。棉花要塞的松 紧适宜。炊时以能通气但不使棉花滑下为准。塞好棉花的移液管尖端，放 在4-5厘米宽的长条纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手 握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌上向前搓转，以螺旋式包扎起来。 上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。3. 棉塞的制作为了过滤空气，避免污染，试管或锥形瓶口需用棉花堵塞（脱脂棉易吸 水，勿用）。为了节省棉花或节省时间，在配置实验临时所用的无菌水 和培养基时，也可以用金属试管帽代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口， 可包扎6-8层纱布以代替棉花。 制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指 和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞， 然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可以用折叠卷 塞法制作棉塞（见图2-2）。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙， 以防外界微生物沿缝隙浸入。棉塞 不宜过紧或过松，塞好后以手提棉 塞，以瓶、管不下落为准。图2-2 棉塞的制作过程实验 培养基的制备与灭菌棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。如制作 时不慎沾上培养基，则不可再用。在棉塞和平口外要包 以厚纸，或将塞好后的试管集中放在铁丝筐内，上面盖 以厚纸，用线绳扎好，准备灭菌，避免灭菌后冷水淋湿 棉塞，并防止接种前培养基水分散失。 上面配制好的各种培养基，分装于锥形瓶内和试管中， 分别加以捆扎，做好标记。然后灭菌备用。一、实验目的1. 了解培养基的配制原理，掌握常用培养基 的制备方法； 2. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。二、基本原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生 物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生 长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营 养元素的要求又有很大差异。不同微生物对PH值要 求不一样，应将培养基调到一定的PH值范围。根据研究目的的不同，可将培养基制成固 体、半固体和液体三种形式。 固体培养基是在液体培养基中加入1.52.0%的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加 入0.5-0.8%的琼脂。有时为了特殊的目的， 也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。由于微生物营养类型不同，应提供不同种类的培 养基。在分离、培养异养微生物时，对一般细菌 常选用牛肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏 合成I号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或 豆芽汁葡萄糖培养基。三、实验器材1. 药品：牛肉膏；蛋白胨；氯化钠；琼脂； 2. 仪器及其他：试管；移液管；锥形瓶；烧杯； 量筒；玻璃棒；漏斗；纱布；棉花；报纸；天平或 台秤；等。四、实验内容 （一）常用培养基的配制1. 肉膏蛋白胨培养基（用于分离及培养细菌）成分： 牛肉膏 0.5g； 蛋白胨 1.0g； 氯化钠 0.5g； 琼脂 1.5－2.0g； 水 100mL； PH 7.0－7.21、配制培养基的基本过程如下： （1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于烧杯中； （2）溶解：在上述烧杯中加入所需水量（根据实验需要可加 入蒸馏水或自来水）搅匀，加热溶解。应在药品全部溶解后 加水补足加热过程所蒸发的水分。配制固体培养基时，应将 已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热 至琼脂完全融化，并不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补 足失去的水分； （3）调PH值：用1N NaOH或1N HCl调PH至7.2，尽量避免回 调； （4）分装、包扎灭菌注意： （1）牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中， 牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮， 故称量时要迅速（2）配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全融化，并不断 搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分；或者将 琼脂单独溶解再加入到已配好的培养基中（3）调pH 检测培养基的pH，边加边搅拌，并随 时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。pH的 调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过 头，以免回调而