测定方法修改.docVIP

淀粉提取与测量 材料与方法 1.1材料：马铃薯 1.2仪器：721型分光光度计；离心机4000r/m 1.3试剂:①0.01N I2-KI：称取1.3g碘和4.0g KI于烧杯中，加少许水，搅拌使其溶解。用蒸馏水定容至1L，贮存与棕色瓶中。 ②80% Ca(NO3)2 ：称取200g Ca(NO3)2?4HO2。加入70ml蒸馏水溶解,定容至250ml。 ③淀粉标准溶液：100ug/ml，称取10g可溶性淀粉，量取约50ml 80%Ca(NO3)2与烧杯中。加热并搅拌至沸腾1min。冷却后转入容量瓶中，用80%Ca(NO3)2洗涤烧杯并转入容量瓶中，最后定容至100ml。 2．方法与步骤 2.1显色条件的确定：取2.0ml淀粉标准溶液。加人100ul 0.01N I2-KI, 摇匀。 于不同波长下比色, 确定最大吸收波长。另取2.0ml淀粉标准溶液。加入不同体积（10-200ul）0.01N I2-KI, 摇匀, 于最大吸收波长下比色以确定其用量对显色的影响, 将淀粉标准溶液与同浓度的用水配制的淀粉溶液按不同比例混合, 获得Ca(NO3)2浓度分别为10、20、30、40、50、60、70、80%的100ug/ml淀粉溶液, 取淀粉溶液2.0ml, 加入100ul 0.01N I2-KI, 摇匀, 于620nm波长下比色以确定不同Ca(NO3)2浓度对显色深度的影响。 2.2标准曲线绘制：准确移取不同体积(0-2.0ml)的淀粉标准溶液，并用80% Ca(NO3)2补充至2.0ml，加入100ul 0.01N I2-KI，摇匀，于620nm波长下比色。 2.3样品测定： ①淀粉提取：取0.1g材料(淀粉含量高的材料可少至10mg), 用5ml 80% 乙酸研磨, 转人离心管离心, 残渣用5ml蒸馏水悬浮洗涤一次, 再次离心后残渣用5ml 80% Ca(NO3)2悬浮, 在沸水中水浴10min, 低速离心(4000转，4min)转, 后将上清液转人20ml容量瓶中, 残渣用80% Ca(NO3)2重复提取2次, 合并提取液, 定容至20ml。 ②显色测定：取淀粉样品0.05-2ml（视样品淀粉含量高低）, 用80% Ca(NO3)2补充至2.0ml, 加人100ul 0.01N I2-KI, 摇匀, 于620nm外测定吸收值, 代人标准曲线即可计算出样品淀粉含量。 ③标准添加法测定：在其中一组试管中加入样品液0.05-1ml, 在另一组试管中加入同样体积的样品液和1ml100ug/ml标准淀粉溶液(用蒸馏水配制), 然后用蒸馏水补足至2ml, 加人100ul 0.01N I2-KI, 摇匀于620nm处测定吸收值, 用下文所述方法计算出样品淀粉含量。 2.4结果计算： ①标准曲线法： 淀粉含量 ②标准添加法： 淀粉含量 二．粗蛋白测定 1. 实验原理 蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50～55%、氢6～8%、氧20～23%、氮15～17%和硫0.3～2.5%。此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。 由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15～17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1g氮就相当于6.25g蛋白质。所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以6.25，就可以计算出样品中的蛋白质含量。 生物样品中的含氮量可用以下反应来测定： 含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290℃→400℃)，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。硫酸铵与浓碱作用可游离出氨，借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的H+浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来H+浓度为止，最后根据所用标准酸的量计算出待测物中总氮量。 2. 仪器和试剂 仪器：消化管或凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、电炉、消化炉、100ml锥形瓶、100ml量筒、表面皿、酸式滴定管、小漏斗、玻璃珠等。 试剂： ⑴. 血清或卵清蛋白等其他含蛋白质样品； ⑵. 消化液：3