第四章灭菌与空气的净化教案分析.pptVIP

第四章 灭菌与空气的净化-p91 在微生物工业生产中必须树立无菌操作观念，必须从培养基制备开始，各个环节彻底灭菌，保证纯培养，否则纯培养失败，产生异常发酵，造成严重的经济损失。通常采取的主要措施是： 1、培养基灭菌； 2、空气灭菌； 3、生物反应器(发酵罐)及其和原料接触的附属管件灭菌； 第一节 灭 菌 灭菌指利用物理和化学的方法杀灭or除去物料及设备中的一切生命物质的过程。 消毒是指用物理和化学的方法杀死物料、设备、用工具内外的病源微生物。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌可达到消毒的目的。 1995.10.30国家主席令第59号《中华人民共和国食品卫生法》已在第八届全国人民代表大会常务委员会第16次会议通过。 一、灭菌的方法P91 灭菌方法很多：干热灭菌法、湿热灭菌法、火焰灭菌法、 电磁波、射线灭菌、化学药品灭菌法及过滤除菌 。根据灭菌对象和要求不同选用不同方法。 二、灭菌标准实际工作中采用致死时间or致死温度or对数残留规律作为灭菌的标准。1.致死时间：指在一定时间内（最短）杀死某一种微生物的最少时间。2.致死温度：指在一定时间内杀死微生物的最少温度。3.对数残留规律：在灭菌中在一定时间内微生物受热死亡，即菌的减少速度与任何一瞬间残留的活菌数成正比。 －dN/dt=KN式中:N—残留活菌数，个； t—受热时间，min； k—比死亡速率常数，S-1，k也称灭菌速率常数，此常数大小与微生物种类及灭菌温度有关；dN/dt—活菌数瞬时变化速率，即死亡速率。若开始灭菌(t = 0)时，培养基中活的微生物数为N0，将－dN/dt=KN积分后可得 ln N0/ Nt= k*t或  t=式中:N0—开始灭菌时原有的活菌数，个； Nt—经过时间t灭菌后的残留菌数，个。 按上式，如果要达到绝对彻底灭菌，即Nt=0所需时间为∞，这不符合实际，在实际中，Nt＜0.001时，达到灭菌要求。温度高，K值增加，灭菌效果增加。在实际中确定合适的灭菌温度，使既能彻底灭菌，又不影响产品风味。 例如：假定某产品的发酵周期40hr,，发酵一开始混进了一个杂菌，若该菌的调整期为6hr，繁殖一代为30min，试计算发酵到21hr的污染程度？解：按对数生长公式： ln Nt/ N0= k*t由繁殖一代时间标出K值 ln 2/ 1= k*0.5 k=1.386（hr-1）求Nt=？ T=21-6=15hr ln N2=kt N2=ekt=2.7181.386*15N2=109（个），即10亿个繁殖15hr后，可达到10亿个菌。 三、培养基的灭菌 1.培养基湿热灭菌方法 1.1连续灭菌：培养基在发酵罐外经一套灭菌设备连续加热灭菌，冷却后送入已灭菌发酵罐的工艺过程。也叫连消：一般分为套管式和汽液混合式两种。 初温420C一般热蒸汽压为0.4MPa（表），灭菌温度1150C，培养液在管间的高温灭菌时间为15~30S，流动线速度要小于0.1m/s。 1.培养基湿热灭菌方法（续）1.2间歇灭菌：即称为实消，专门的杀菌罐or分批培养基全部泵入发酵罐在罐内通入蒸汽加热致死温度保持一定时间。1.3固体培养灭菌：蒸煮灭菌，转鼓式灭菌机，解决了固体培养基流动性差，，不易翻动，吸水加热易成团问题。 分批灭菌的操作 在培养基灭菌之前，通常应先将与罐相连的分空气过滤器用蒸汽灭菌并用空气吹干。 实罐灭菌时，先将输料管路内的污水放掉冲净，然后将配制好的培养基泵送至发酵罐（种子罐或料罐）内，同时开动搅拌器进行灭菌。 灭菌前先将各排气阀打开，将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热，待罐温升至80~90℃，将排气阀逐渐关小。 接着将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中，使罐温上升到118~120℃，罐压维持在0.09~0.1MPa（表压），并保持30min左右。 无论与罐连通的管路如何配制，在实消时均应遵循“不进则出”的原则。这样才能保证灭菌彻底，不留死角。 保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷却水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。 2.影响培养基灭菌的因素P97 除了所污染杂菌的种类、数量灭菌温度和时间外，培养基成分，PH值，培养基中颗粒、泡沫等对培养灭菌也有影响。 2.1培养成分； 2.2pH值； 2.3培养中的颗粒； 2.4泡沫； 2.5其它;如培养基中微生物的数量、微生物细胞的含水量，菌龄，微生物的耐热性等均会影响培养基的灭菌效果。 3.灭菌时间计算见P98的例4-14.连续灭菌和分批灭菌的比较P99连续灭菌和分批灭菌具有很多优点：①可