第3章器官培养.docVIP

第3章 器官培养（3学时） 第一节 根的培养 第二节 茎尖的培养 第三节 叶的培养 本章小结 目的要求： (1)一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择； (2)掌握茎尖培养的种类和操作步骤； (3)掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整； (4)掌握离体叶片的培养步骤； 器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。以器官作为外植体进行离体培养，是植物组织培养中最主要的一个方面，进行的植物种类最多，应用的范围也最广。器官培养不仅是研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成的最好材料和方法，而且在生产实践上具有重要的应用价值，如利用茎、叶和花器培养建立的试管苗，可在短期内提高繁殖速率，进行名贵品种的快速繁殖；利用茎尖培养可得到脱毒试管苗，解决品种的退化问题，提高产量和质量；将植物器官作诱变处理，用器官培养可得到突变株，进行细胞突变育种。 第一节 根的培养 一、离体根的培养方法 离体根培养是进行根系生理和代谢研究的最优良的实验体系，因为根系生长快，代谢强，变异小，加上无菌，不受微生物的干扰，并能根据研究需要，改变培养的成分来研究其营养吸收、生长和代谢的变化。另一方面，由根细胞可再生成植株，不仅证明根细胞的全能性，而且也能产生无性繁殖系，用于生产实践。其培养方法如下： (1)培养基 多为无机离子浓度低的White培养基，其他培养基如MS，B，等也可采用，但必须将其浓度稀释到2/3或1/2。 (2)根无性繁殖系的建立 将种子进行表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖一端切取长1.2cra的根尖，接种于培养基中。这些根的培养物生长甚快，几天后发育出侧根。待侧根生长约1周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。培养条件为暗光和25～27℃。 (3)植株再生培养 根段的离体培养也可以用来再生植株。第一步诱导形成愈伤组织。第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、在愈伤组织上分化成小植株。 二、离体根培养所用的培养基 离体根培养所用的培养基多为无机离子浓度低的White培养基或其他培养基。 三、影响离体根生长的因素 1、基因型 2、营养条件 3、生长物质 4、pH 5、光照和温度 第二节? 茎尖的培养 一、概念和意义 茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。这是组织培养中用得最多的一个取材部位。茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。微茎尖指带有1～2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。普通茎尖指较大的茎尖（如几mm到几十mm）、芽尖及侧芽。 二、茎尖的培养的一般方法 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短。茎尖培养步骤如下： (1)取材 挑选杂菌污染少，生长不久的茎尖。木本植物可在取材前对茎尖喷几次灭菌药剂。以保证材料不带或少带菌。用于普通茎尖培养，可先从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cra以上的顶梢。 (2)消毒接种 将采集到的茎尖切成0.5～1.0cm长，并将其大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。 将茎尖置于流水冲洗2～4h，再在95％的酒精中处理30s，然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5～8min，最后用无菌水冲洗数次，准备接种。 (3)接种 为了减少污染，可在接种前再剥掉一些叶片，使茎尖为0.5cm左右大小。这样取茎尖大小只能作为快速繁殖。有些植物的茎尖由于多酚氧化酶的氧化作用而变褐。所以在接种时，不能用生锈的解剖刀，动作要敏捷，随切随接，减少伤口在空气中暴露的时间，也可配制1％～5％Vc液，将切下的茎尖材料浸入处理一下。 (4)培养的方法和程序 ①培养基 多数茎尖培养采用MS作为基本培养基或略加修改，或补加其他物质。常用的其他培养基有White，Heller，等。培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA, NAA等，它们能有效地促进芽的生长发育，但是浓度不能太高，一般用0.1mg／L左右，高于此浓度，往往产生畸变芽或形成愈伤组织。但要注意不同植物对生长素的反应是不同的。 茎尖在培养过程中会出现生长太慢、生长太快和生长正常等三种类型。生长太慢即接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐变绿，出现绿色小点，细胞逐渐老化而进人休眠状态，或者逐渐变褐死亡。引起的原因是生长素浓度太低，或是温度过低或过高；生长太快型是接种后茎尖迅速增大，在茎尖基部产生愈伤组织，并迅速增殖，而茎尖不伸长，久之茎尖也形成愈伤组织，从而丧失发育成苗的能力。引起的原因一是生长素浓度过高，引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成。二是光照太弱或温度太高。生长正常型是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色逐渐变绿，并逐渐