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技能与实训
实验一?????? 普通光学显微镜的构造和使用
一、目的与要求
通过显微镜使用实训,掌握光学显微镜的基本结构与使用方法
二、原理
普通光学显微镱由机械装置和光学系统2大部分构成。在光学系统中,物镱的性能最为关键,它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜中配置的几种物镱以油镱的放大倍数最大,与其它物镜相比,使用较特殊,需在载玻片与镜头之间加滴镜油,以增加照明亮度和提高分辨率。
三、操作步骤
1.检查实验器材是否完备。?
2.取镜和安放:??⑴取镜:右手握住镜臂,左手托住镜座;?⑵安放:把显微镜轻轻地放在实验桌上略偏左、离实验桌边缘7厘米处。⑶用手转动粗准焦螺旋,使镜筒升高,安装好物镜和目镜
3.对光:⑴转动转换器,使低倍物镜正对通光孔镜端与孔保持2厘米距离。⑵转动遮光器,使大的光圈对准通光孔。⑶左眼注视目镜内,右眼睁开,同时,用手转动反光镜对向光源,直到目镜里看到白亮的视野。
4.低倍镜观察:?⑴安放装片。把要观察的装片放在载物台上,有标本的一面向上,使标本正对通光孔的中心,然后用压片夹压住。??⑵下降镜筒。侧目注视物镜头,用手旋转粗准焦螺旋,直到物镜头接近装片为止⑶上升镜筒。左眼注视目镜内,用手旋转粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到从目镜内看清物像为止。再轻微来回转动细焦螺旋,使物像更清晰;
5.高倍镜观察:在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置,以聚光镜器光圈及视野进行适当调节后微调细调节器使物象清晰,利用推进器移动标本仔细观察并记录。
6.整理实验器材:⑴把装片取下放回原处。⑵把显微镜外表擦拭干净。转动转换器。使两物镜偏到通光孔两侧,再把镜筒降低到最低位置最后把显微镜装进镜箱,送回原处。
实验二?????? 用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
一、目的与要求
通过用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体实训,掌握高倍显微镜的使用方法和临时装片方法。
实验原理
(1)叶绿体的观察植物绿色部位的细胞中含有叶绿体。如果将叶片的横切片制成临时装片,就可以在显微镜下观察到叶绿体。某些植物幼嫩的叶也可直接用于观察叶绿体。
(2)线粒体的观察线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所,内含细胞色素氧化酶系。健那绿是一种碱性染料,可以专一性地对线粒体进行染色。与线粒体内的细胞色素氧化酶系发生作用时,染料始终保持氧化状态,呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的状态。通过染色可以在高倍显微镜下观察到呈现蓝绿色的线粒体。
操作步骤?
材料? 藓类、菠菜或黑藻的叶,人的口腔上皮细胞,
用具? 显微镜,载玻片,盖玻片,滴管,镊子,消毒牙签。
3.试剂及配制方法
(1)试剂? 清水,健那绿染液。
(2)试剂的配制方法?
①等渗溶液称取0.85 g NaCl、0.25 g KCl、0.03 g CaCl2溶于100 mL蒸馏水中。
②健那绿染液先称取10 mg健那绿溶于1 mL等渗溶液中,用滤纸过滤。再取滤液加入49 mL等渗溶液中,即为染色液。?
4.操作要点
(1)制作临时装片
①在观察黑藻前10 min,用40 °C的水浸泡黑藻的叶。这样的叶用于制作临时装片,便于观察到黑藻的叶绿体随细胞质而流动。
②在适宜的温度下制作人的口腔上皮细胞临时装片。可以将健那绿染液保持在37 °C,尽可能使人的口腔上皮细胞在染色期间保持在生活状态。
③用健那绿染液染色时,要染色10~15 min。在此期间要适当添加染液,以保证细胞不干燥。?
(2)观察?
①观察时,注意通过调整光圈来调节反射光线的强弱,使进入物镜的光线不要太强。
②按照正确的观察顺序,先用低倍镜找到观察的物像,通过移动临时装片选择单层的典型细胞,再转换高倍镜进行观察。
实验三?????? 观察植物细胞质壁分离与复原
一.目的与要求
通过动植物细胞吸水和失水实训,掌握动植物细胞吸水和失水的原理,理解细胞内外物质运输的特点。
二.实验原理——内外因法?
内部原因:构成植物细胞的细胞壁和原生质层都具有一定程度的伸缩性,但细胞壁的伸缩性较小,而原生质层的伸缩性较大,这样细胞壁和原生质层之间才能发生分离和复原现象。?
????外部原因:与外界溶液有关。外界溶液的浓度>细胞液的浓度???????????质壁分离?
外界溶液的浓度<细胞液的浓度???????????质壁分离复原
三.实验步骤?
????????制作临时装片——?????????选择活的紫色洋葱鳞片叶外表皮???
????????高倍镜观察——??? 观察到紫色的中央大液泡,原生质层紧贴细胞壁???
????????质壁分离实验——??????? ?一侧滴入蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引,重复几次。??
?? 高倍显微镜观察——?? ??中央大液泡逐渐变小且颜色加深,原生质与细
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