细胞培养技术在肿瘤学研究分析中应用.docVIP

细胞培养技术在肿瘤学研究中的应用 （姓名：张晓娟 学号：2006252 昆明医学院附一院 ） [摘要]: 细胞培养技术是生物医学中的一项重要技术，在肿瘤学研究中有着广泛的应用。癌细胞有一系列不同于正常细胞的特性，如分化程度减弱，细胞形态和功能异常，自主性生长，浸润转移性和免疫性异常，体外培养无接触抑制和在软琼脂中形成集落的特性，癌细胞体外培养是研究癌变机理和癌细胞行为的极好方法，能为肿瘤病因学、遗传学和药理学等提供便利的条件。同时也是研究癌细胞的药物敏感性和诱导分化发生恶性逆转的最理想的对象。cell culture）细胞培养的含义，即是把来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。还可以利用细胞进行细胞工程与细胞癌变等重大问题的研究。细胞培养也是研究病毒与研制疫苗的基础技术。因此细胞培养技术在遗传学、免疫学、肿瘤学、病毒学、分子生物学等领域已得到广泛的应用。 一：细胞培养基本操作技术 1 材料 从理论上讲，各种动物和人体内的所有组织都可进行培养。实际上幼体组织尤其是胚胎组织比年老个体的组织容易培养；分化程度低的组织比分化程度高的容易生长；肿瘤组织比正常组织容易培养。在无特定要求时，取易培养的组织进行培养，成功率高。取材之后，最好立即培养，如因故不能培养时，应把组织切成1立方厘米左右的小块，置于培养液中，4℃贮存；存放时间不宜超过24 小时，放置时间过长或组织块太大，细胞仍易坏死。从体内取材时，应严格保持无菌，防止受到任何污染，也要避免受到紫外线照射或接触任何化学试剂及有害药物如碘、汞等。取肿瘤和其它病理组织时容易带菌，为减少污染，可用含500 ~ 1000 单位／毫升的青、链霉素BSS 液，漂洗5 ~ 10 分钟后再做培养处理。 2 组织的分离 从体内取出的各种组织均由众多细胞和纤维成分组成，而且结合十分紧密。一般体积大于1mm3 的组织块置于培养瓶中后，处于周边的少量细胞即可能生存和生增殖，但大部分中心的细胞可因营养穿透有限而代谢良，且受纤维成分束缚而难以移出。为获取多量生长良好的细胞，必须把组织细胞分散开，使细胞解离出来；能达到单细胞水平更好，同时并不使细胞受伤害，细胞能很好生长。分散组织的方法有机械法和化学法两种；根据组织种类和培养要求，宜采用相应的手段。 3 细胞计数法 细胞悬液制备后，需要计算悬液中所含细胞数量；一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力，接种后能够生长增殖，所以在接种前应先检查一下细胞的活力。 4 细胞冻存 细胞一般冻存在液氮中，温度达-196℃，贮存时间几乎是无限的。用时解冻细胞仍能生长增殖，为培养工作提供了极大的方便。当前已有适用于冻存大量细胞用的自动化冻存装置，但非所有实验室拥有此种设备，一般实验室仍常用35 立升液氮罐贮存法。 5 细胞运送 当前培养细胞既可在国内相互寄赠，也可进行国际间的交流，为此要有运输细胞的方法。装运方法有两种，一是用液氮或干冰保存，效果较好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸发均较快，适于空运，比较麻烦；另为充液法，比较简便。 二：细胞培养技术在肿瘤研究中的应用 1 肿瘤病因和发病机制的研究 癌细胞在体内恶性变时，易于形成肿瘤，但到体外培养时往往又难以培养成功，这不仅仅是因成纤维细胞的抑制作用，更重要的是体外缺乏有利于生长的微环境，由此可见环境对癌发生和发展是有很大作用的。在肿瘤细胞的动物致癌实验时，所选择的动物都是经理化因素处理后造成骨髓和免疫抑制的动物或细胞免疫功能缺陷的无胸腺裸鼠，这也可以证明肿瘤细胞在这种动物体内易于形成肿瘤，也是与动物体内的微环境有关。 体外正常细胞的转化试验中更进一步证明了物理因素（如射线）化学因素（化学致癌剂）及生物因素（致癌病毒、EB病毒、SV40和多发瘤病毒等），均能使正常细胞发生转化，致使正常细胞永生化或恶性化，为癌的诱发因素和环境提供了实验依据，环境因素或药物的致畸，致突变研究也可为该环境条件或药物的致癌性提供实验依据，因此细胞培养是癌的发生和发展研究的理想实验研究手段。抗癌药物筛选方面的研究 不同的癌细胞对不同的化疗药物具有不同的敏感性，因此采用癌细胞体外培养方法，既可研究某种药物对不同癌细胞的敏感性，为药物抗癌敏感谱提供依据，同时又可采用某种癌细胞开展对不同药物，不同剂量的敏感性研究，以筛选出对该肿瘤最敏感的化疗药物和使用剂量，供人体治疗时参考。癌基因和抑癌基因方面的研究 细胞的恶性变不仅与癌基因（原癌基因）的活化有关，而且与抑癌基因功能受阻也有关。人体细胞中既存在有癌基因（原癌基因），又有抑癌基因的存在，实验证明癌的发生和发展与这两种基因的表达调控密切相关。这些基因在细胞内表达水平，我们可