药敏(比例法)分析报告.ppt

* * * * 稳、准，需要联系达到稳定性。只让接种环接触菌液， * * * * * * * * * * * * * * * * 结果判读 对照 Isoniazid Ethambutol Inoculum 10-2 ++++ ++ 3 10-4 26 9 0 % resistant 34.6 0.1 Interpretation Resistant Susceptible -2 -4 -2 -4 质量控制 若高稀释度菌液（10-4mg/ml,低接种菌量）在对照培养基上生长的菌落数少于20个菌落，则应从对照管传代培养，重复试验。 每批实验均需增加H37Rv标准菌株，若标准菌株生长异常，则本批实验结果全部无效。 注意事项 选择新鲜、生长旺盛的菌落进行药敏试验，生长不良或陈旧菌株应传代后再进行试验 比浊、菌液稀释应力求精确，以保证接种菌量的准确。 下列操作应严格按技术规范进行，防止产生气溶胶：挑取菌落、磨菌、菌液稀释和接种、烧灼接种环。 实验室安全 实验室合理布局 涡旋振荡、接种时容易产生气溶胶，应注意正确操作 振荡后不能立即打开瓶盖，需静置片刻 接种时禁止反复吹吸 操作中一旦标本溅落，立即以5%石炭酸覆盖，至少30分钟 比例法药敏试验流程 基础液 改良L-J 对照培养基 含药培养基 药物储存液 混合、摇匀 100ml 1ml 磨菌 分装 凝固 分装 凝固 1mg/ml菌悬液 10-4 mg/ml 10-2 mg/ml 100倍稀释 100倍稀释 接种0.01ml 接种0.01ml 2-3周 新鲜菌落 练习：结果的解释 编号 对照 含药 结果？ －2 －4 －2 －4 1 4＋ 1＋ － － 2 3＋ 20 1＋ 5 3 3＋ 20 15 － 4 3＋ 20 30 － 5 3＋ 20 10 － 6 3＋ ＋ C C 7 15 1 － － 初步菌种鉴定 基于培养的检测 生长速度 是否产生色素 生长温度 典型形态 选择性抑制(PNB培养基) 生长速度 快速生长: 1周内 不是 TB 生长缓慢: 通常 3 周, 有时达到6 周 可能为TB 生长温度 孵育: 36 +/-1°C M.tuberculosis 在过低或过高 的环境下均不生长 42°C 蟾分枝杆菌 色素产生情况 不产生色素 TB 产生色素 非TB 菌落形态 M.tuberculosis 菌落形态 M.chelonae(龟型分枝杆菌) M.Phlei（草分枝杆菌） PNB选择性培养基 对照培养基 含PNB 培养基 37°C孵育，28天后报告结果 药敏试验时选择10-2稀释浓度菌液用滴管或移液器接种0.1ml(2-3滴) PNB选择性培养基 结果报告 对照培养基和PNB培养基上均生长 非结核分枝杆菌复合群NTM 对照培养基上生长很好，但PNB培养基上未生长或几个菌落 结核分枝杆菌复核群 对照和PNB培养基上均未生长 不能判读结果需重做 非结核分枝杆菌复合群（NTM） 非结核性分枝杆菌（NTM)系指分枝杆菌属中，除结核分枝杆菌复合群(人型、牛型、非洲型和田鼠型结核分枝杆菌)和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，由NTM引起的疾病称为非结核性分枝杆菌病。 近年来由于检出率逐渐增多，相应的对其引起的各种疾病的认识也在逐渐提高。 非结核性分枝杆菌中大多数为腐物寄生菌，毒力低，属于条件致病菌。 非结核性分枝杆菌病的症状可有肺内、肺外之分，肺外感染可涉及皮肤、骨骼和淋巴结等。 NTM广泛分布于自然界的土壤、尘埃、流水和生牛奶中。显微镜下NTM形态与结核杆菌相似，抗酸染色呈红色，但在培养、生化特性与结核杆菌不同。 非结核分枝杆菌特点 非结核分枝杆菌特点 非结核分枝杆菌是否有致病性可用抗煮沸试验加以区别。 非致病株煮沸1min即失去抗酸性，而致病株能耐10min，甚至高压灭菌亦不失去抗酸性。 结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别，除热触酶试检外，可将菌苔置含盐水小滴的玻片上研磨，前者不易乳化而后者容易乳化。 　　 由于许多非结核分枝杆菌菌株对常用的异烟肼、链霉素等耐药，但对利福平有一定敏感性;现多主张用利福平、乙胺丁醇和异烟肼联合使用。 溃疡分枝杆菌则仅对卡那霉素等氨基糖苷类抗结核菌药物敏感，但鸟-