仪器课件分子发光法分析报告.ppt

7-2 荧光分析仪器 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 组成：激发光源、样品池、双单色器、检测器。 特殊点：两个单色器，光源与检测器通常成直角。 （1）激发光源 在紫外-可见区范围，通常的光源是氙灯和高压汞灯，此外高功率连续可调染料激光光源就是一种新型荧光激发光源。 （2）样品池 荧光用的样品池须用低荧光的材料制成，通常用石英，形状以方形和长方形为宜。 （3）单色器 光栅，激发单色器用于选择激发波长；发射单色器，用于分离出荧光发射波长。 （4）检测器 由光电管和光电倍增管作检测器，并与激发光成直角。 7-3 荧光分析法及其应用 由于能产生荧光（磷光）的化合物占被分析物的数量相当有限的，并且许多化合物几乎在同一波长产生光致发光，所以荧光（磷光）法很少用于定性分析。 分子发光分析法是最灵敏的分析方法之一，其灵敏度在很多情况下比紫外-可见吸收光谱法要高的多，所以更适合低浓度的分析。 7-3-1 定量分析方法 （1）校准曲线法 F Cs Fx Cx （2）标准对照法 如果荧光物质的校准曲线通过零点，就可以选择其线性范围内某一浓度的标准溶液，用标准对照法测定。 7-3-2 应用 1. 无机化合物的分析 很多无机离子能与一些有机试剂形成荧光络合物而被测定，这种试剂称为荧光试剂，这种方法称为直接荧光法。还有一些无机离子，它们不能形成荧光络合物，但能使其他物质的荧光减弱，可利用荧光猝灭法测定。 （1）直接荧光法：铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土 （2）荧光猝灭法：氟、硫、铁、银、钴、镍 2. 有机化合物的分析 此外，药物中的胺类、甾族类、抗生素、维生素、氨基酸、蛋白质和酶等大多具有荧光，可用荧光法测定。 7-4 磷光分析法 磷光和荧光都是光致发光，任何发射磷光的物质也都具有两个特征光谱，即磷光激发光谱和磷光发射光谱。其定量分析的依据是在一定条件下磷光强度与磷光物质浓度成正比。在仪器应用方面磷光法和荧光法也相似。本节主要讨论磷光法的一些特点。 7-4-1 磷光分析法原理 1. 磷光的特点 分子磷光是第一激发单重态（S1）的最低振动能级，经系间跨越跃迁到第一激发三重态（T1），并经振动弛豫至最低振动能层，然后跃迁回到基态发生的。与荧光相比，磷光具有如下三个特点： （1）磷光辐射的波长比荧光长 （2）磷光寿命比荧光长 （3）磷光的寿命和辐射强度对于重原子和顺磁性离子是极其敏感的 2. 低温磷光 由于激发三重态的寿命长，使激发态分子发生 T1? S0这种分子内部的内转化非辐射去活化过程以及激发态分子与周围的溶剂分子间发生碰撞和能量转移过程，或发生某些光化学反应的几率增大，这些都将使磷光强度减弱，甚至完全消失。为减少这些去活化过程的影响，通常应在低温下测量磷光。 低温磷光分析中，液氮是最常用的合适的冷却剂。此时，许多介质形成刚性玻璃体，振动耦合和碰撞等无辐射去活化过程降到最低限度，几乎所有处于激发三重态的分子都会发出明亮的磷光。 3. 重原子效应 在含有重原子的溶剂中或在磷光物质中引入重原子取代基都可以提高磷光物质的磷光强度。利用重原子效应是提高磷光分析灵敏度简单而有效的办法。 4. 室温磷光 （1）固体基质室温磷光法：将测定的有机化合物吸附在固体基质（载体）上，然后在室温条件下进行磷光测定。 （2）胶束增稳溶液室温磷光法：在试液中加入适当的表面活性剂，使其与被测物质形成胶束缔合物，以增加被分析物的刚性，减小因碰撞引起的能量损失，从而可在溶液中测量室温磷光。 7-4-3 应用 磷光法主要用于测定有机化合物和生物物质，如核酸、氨基酸、石油产物、多环芳烃、农药、医药和临床检验、生物碱及植物生长激素等方面。与荧光法互为补充，成为痕量有机物分析的重要手段。 7-5 化学发光分析法 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质产生的光辐射。 发生于生物体的化学发光，称为生物发光。 利用化学发光而建立起来的方法，称为化学发光分析法。 7-5-1 化学发光分析法的基本原理 1. 化学发光分析法的基本原理 化学发光是吸收化学反应过程产生的化学能，而使反应产物分子激发所发射的光。任何一个化学发光反应都应包括化学激发和发光两个步骤。 化学发光反应效率? CL，又称化学发光的总量子产率。它决定于生成激发态产物分子的化学激发效率?CE和激发态分子的发射效率?EM。定义为： ?CL =发射光子的分子数 / 参加反应的分子数= ?CE??EM A P* P+hv 激活 发光 化学发光必须满足如下条件： （1）化学反应必须提供足够的激发能，激发能主要来源于反应焓。 （2）要有