动物细胞融合与单体克隆抗体要点分析.pptVIP

2.3单克隆抗体的应用 练习 1、动物细胞融合技术最重要的用途是（ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 * 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 本节要点 一、动物细胞融合技术 二、动物细胞融合基本原理 三、诱导方式？与植物细胞杂交的不同的是？ 四、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 五、获得抗体的传统方法 六、单克隆抗体的含义？如何制备？优点？ 七、整个制备过程为何要经过两次筛选? 一、动物细胞融合技术 1.概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 二、动物细胞融合基本原理 细胞膜的流动性 三、诱导方式 物理法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激、振动、离心 聚乙二醇（PEG） 如：仙台病毒 为什么要用灭活的病毒？ 仙台病毒 物理/化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 灭活的病毒 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞融合， 形成杂种细胞 四、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 用途 诱导方法 细胞融合的方法 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 制备单克隆抗体 灭活的病毒 为什么“甲流”康复者或接种疫苗1月以上者的血浆会成为救治重症“甲流”患者的妙药？ 血浆中的抗体会与“甲流”病毒反应，从而将病毒消灭。 五、获得抗体的传统方法 把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。 缺点： 人们发现，B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。 怎样才能获得大量的单一性抗体呢？ 产量低 纯度低 特异性差 抗原决定簇： 抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。 各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。 抗体与相应抗原特异性结合 抗体由何种细胞产生？主要分布在哪里? 怎样才能获得单一性抗体？ 大量克隆单一的B淋巴细胞 其寿命仅有几天，无法长期体外培养 动物细胞培养技术 骨髓瘤细胞 无限增殖 杂交瘤细胞 产生抗体 无限增殖 细胞 融合 G. Kohler C. Milstein 英国科学家米尔斯坦和科勒于1975年设计和实践了这个想法，并获得成功。摘得1984年诺贝尔生理及医学奖。 六、单克隆抗体的制备 用抗原免疫小鼠 骨髓瘤细胞的培养 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种细胞 由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡 B淋巴细胞培养几天后死亡 杂交瘤细胞 置于选择培养基上培养 细胞膜的流动性 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞 诱导的手段？ 融合后细胞的类型？ AB杂种细胞遗传物质 有什么特点？ 三种AA、AB、BB（A、B） 含两种生物的遗传物质 1.2动物细胞融合过程 原理？ 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。 ②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性孔 方法——抗原-抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 多孔细胞培养板 阳性克隆的筛选和克隆化培养 用培养液稀释 注射到小鼠体内 体外培养 由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。 单克隆抗体 七、