分子生物学基因突变要点分析.ppt

在引物设计中将3’端和/或附近设计一碱基，使其仅能与突变型或野生型相同（正链引物）或互补（反链引物），从而只扩增突变型或野生型基因，根据扩增带的有无进行突变纯合子、杂合子或野生型的判断。 M 1 2 3 左图 AS-PCR检测两个基因突变位点。M-Marker，1, 2-正常组，3-突变组 等位基因特异性PCR (AS-PCR) 根据PCR产物的有无直接进行突变分析的方法。 1、高效毛细管电泳技术简介 毛细管电泳(capillary electrophoresis)又称高效毛细管电泳(high-performance capillary electrophoresis, HPCE)，是20世纪80年代中期问世的一种高效液相分离法，是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的产物。是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或/和分配系数不同进行高效、快速分离的一种电泳新技术。 2、高效毛细管电泳技术基本原理 最基本的高效毛细管电泳仪器如图所示： 毛细管电泳基本仪器结构示意图 HV. 高压电源(0~30kV)； C. 毛细管；E. 电极槽；Pt. 铂电极；D. 在柱检测器；S. 样品； DA. 数据采集处理系统 高效毛细管电泳（High Perfor-mance Capillary Electrophoresis） DNA突变分析及DNA排序 （Analysis of Nucleic Acids and Sequence of DNA） CGE模式分离碱基对相差1000倍的DNA图谱 Separation by Electro-osmotic Flow 基因芯片（gene chips) DNA芯片 (DNA chips) DNA微阵列（DNA microarray) 将数以万计的DNA探针按照一定的顺序排列固化于支持物表面上，产生二维DNA高密度的分子探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，再利用计算机控制的信号产生、识别及图象处理系统进行结果分析来实现对生物样品快速、并行、高效地检测。 基因芯片技术是分子生物学、信息科学、材料科学、微加工技术、光学检测技术、计算机技术等多学科相互结合的产物。 基因芯片技术检测基因突变 DNA方阵的构建 芯片制作 硅片、玻璃片、瓷片或聚丙烯膜、尼龙膜等支持物 带标记样品 DNA或mRNA的准备 分子杂交 杂交图谱的检测和分析 计算机控制的信号产生、 识别及图象处理系统 二维DNA高密度 的分子探针阵列 生物样品快速、并行、高效地检测 通常是荧光标记 PCR扩增 基因芯片突变检测原理示意 DNA芯片 High-throughput gene expression analysis DNA测序 DNA测序：测序PCR产物直接测序法被视为突变 检测的金标准和筛查方法的定性诊断方法 。 Technical Concerns 国际人类基因组单体型图计划 International HapMap Project 英皇室血友病家系 吴乃虎，p98 * 人类基因突变及疾病相关数据库 FBN1 mutation - Human fibrillin 1 mutation db (Marfan syndrome) G6PD - Human G6PD deficiency resource Galt mutation - Human galactose-1-phosphate uridylyltransferase mutation db (Galactosemia) HEXAdb - Human Hexosaminidase A mutation db (Tay-sachs disease) IL2RGbase - Human IL2RG (Interleukin-2 receptor gamma) mutation db (X-SCID) L1CAM mutation - Human L1CAM mutation db LDLR mutation - Human LDLR mutation db (Familial hypercholesterolemia) LQTSdb - Long QT syndrome db NCF1base - Human NCF1 mutation db NCF2base - Human NCF2 mutation db Neuromuscular diseases w