11级DNS法测定还原糖含量ppt最终版.pptVIP

DNS法测还原糖含量 ——3,5-二硝基水杨酸法 目的 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法 原理 　　 1.还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖。 2.在NaOH和丙三醇存在下，DNS与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物呈桔红色，在一定范围内，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 3.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 　　　 反应化学方程式—— 桔红色 黄色 实验材料、主要仪器和试剂 1、试剂 （1）1mg/mL葡萄糖标准液 　　　准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 　　　将6.3g DNS和262mL 2Mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 （3）碘-碘化钾溶液 （4）6mol/l NaOH （5）0.1%酚酞指示剂 （6）6mol/l HCl溶液 2、材料 淀粉 3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电子万用炉，试管若干 实验步骤 一、制作葡萄糖标曲线 取10支试管，按下表加入试剂 试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 葡萄糖标准液/ml 0 0.2 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.2 1.4 蒸馏水/ml 2.0 1.8 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.0 0.8 0.6 DNS/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量/mg 0 0.2 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.2 1.4 混合均匀 →沸水中加热5min取出 →冷水冷却至室温 →各管加入21.5ml蒸馏水→测定吸光度并绘制标准曲线 （550nm波长处） 二、样品中还原糖提取 准确称取0.65g面粉， 放在100ml烧杯中，先 以少量蒸馏水调成 糊状，然后加入15ml 蒸馏水，混匀，于50℃恒温保温20min，时搅拌，使还原糖浸出，过滤，将滤液全部收集在25ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。 锥形瓶（0.5g面粉+10ml盐酸+蒸馏水15ml）加热30min 检验水解是否完成（I-KI溶液） 冷却至室温后 中和并定容到50ml 过滤取10ml于 100ml容量瓶 取滤液又定容至刻度 （即为稀释50倍） 三.总糖提取 四、样品中含糖量的测定 试剂 空白 还原糖 总糖 样品溶液/ml 0 1.0 1.0 蒸馏水/ml 2.0 1.0 1.0 水杨酸/ml 1.5 1.5 1.5 将各管溶液混合均匀后在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温，在向各管加入21.5ml蒸馏水，摇匀 在波长为550nm处测定吸光度，并比对标准曲线得出糖的含量