Survivin与Smac在结肠癌中的表达.docVIP

Survivin和Smac在结肠癌中的表达 [摘要] 目的：观察Survivin和Smac在结肠癌中的表达情况及临床意义。方法：利用免疫组织化学方法分别检测60例结肠癌组织、46例癌旁组织和40例正常结肠粘膜组织中Survivin和Smac蛋白的表达情况。结果：结肠癌组织中，Survivin阳性率均高于癌旁组织和正常结肠粘膜组织(P0.05)，Smac阳性率均低于癌旁组织和正常结肠粘膜组织(P0.05)。结肠癌组织中，Survivin表达与组织学分型无关(P0．05)，癌组织分化程度低，出现淋巴结转移、Dukes分期在C、D期的，Survivin表达明显升高(P0．05)；Smac表达与组织学分型无关(P0．05)，癌组织分化程度低，出现淋巴结转移和Dukes分期在C、D期的，Smac表达明显降低(P0．05)。。结论：Survivin及Smac在结肠癌的发生、侵袭转移过程中有着重大作用。 [关键词] Survivin；Smac；结肠癌 结肠癌是最常见的消化道肿瘤之一，其发病率和死亡率均居恶性肿瘤的第三位，结肠癌的发生发展与多种癌基因的激活和抑癌基因的失活有关，是一种多基因控制的遗传性疾病[1]。Survivin基因是近年来发现的一种凋亡抑制基因，其高表达可抑制多种因素诱导的细胞凋亡，促进细胞增生[2]。第二个线粒体衍生的半胱氨酸酶蛋白激活剂（second mitochondrial activator of caspase,Smac）,是一种线粒体促凋亡蛋白质。本研究通过免疫组织化学法检测Survivin和Smac在结肠癌组织，癌旁组织和正常结肠黏膜组织中的表达，进一步探讨Survivin和Smac表达的临床意义。 1 资料与方法 1．1 一般资料 收集我院病理科2005年1月至2011年12月期间送检的结肠癌组织60例、癌旁组织46例和正常结肠粘膜组织40例，所有患者术前均未接受放化疗。其中管状腺癌29例，乳头状腺癌26例，粘液腺癌5例；高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化癌21例；淋巴结转移者32例，无淋巴结转移者28例；Dukes分期：A期8例，B期20例，C期23例，D期9例。 1.2主要试剂 Survivin兔抗人多克隆抗体购自上海亿欣生物技术有限公司，兔抗人Smac蛋白多克隆浓缩抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，SP-9001兔SP Kit免疫组化染色试剂盒、Harris 苏木素染液、浓缩DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3方法 所有组织标本均经10％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片。按以下步骤进行(1) 将结肠组织石蜡切片常规脱蜡入水，PBS冲洗3次；(2) 3%H2O2室温孵育10 min，PBS冲洗3次；(3) 枸橼酸盐缓冲液 (pH6.0) 微波修复10 min，(4) 正常山羊血清工作液滴加于切片，室温孵育15 min (用于灭活内源性过氧化物酶)，倾去，勿洗；(5) 加入稀释后的一抗 (兔抗人Survivin抗体1: 100，兔抗人Smac抗体1: 100)，4°C孵育过夜。PBS冲洗3次；(6) 滴加生物素化标记山羊抗兔二抗IgG 50 (l，室温孵育15 min，PBS冲洗3 min，共3次；(7) 滴加辣根过氧化物酶标记链霉素卵白素工作液，室温孵育15 min，PBS冲洗3 min，共3次；(8) DAB显色(镜下控制)，自来水充分冲洗；(9) 苏木素复染1~2 min，盐酸酒精分化30 s，水洗2 min；(10) 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片；(11)结果观察。同时作阳性对照和阴性对照。 1.4阳性结果判断 Survivin阳性着色分布于细胞质和(或)细胞核，染色呈浅黄-棕褐色，小片状或弥漫性分布；Smac阳性着色主要分布于细胞质，染色呈浅黄-棕黄色，每个切片选择5个不重复的高倍视野(×400)，观察每个镜下细胞总数目和染色细胞数。以染色细胞数＞5%为阳性组，≤5%为阴性组。 1.5统计学方法 实验数据数据采用SPSS18.0统计软件进行分析，计数资料用卡方检验，P0.05有统计学意义。 2结果 2.1结肠癌组织中的Survivin的表达 Survivin在结肠癌组织中，主要表达在细胞质和细胞核中，呈浅黄-棕褐色，60例标本中有50例呈阳性表达，阳性率为83.33%；癌旁结肠组织46例标本中有21例呈阳性表达，阳性率为45.65%；正常结肠粘膜组织40例标本中没有呈阳性表达，阳性率为0%。结肠癌组织阳性表达率和癌旁结肠组织相比差异有统计学意义(χ2 =16.72，P0．05)；结肠癌组织阳性表达率和正常结肠粘膜组织相比差异有统计学意义(χ2 =7.41，P0.01)。(见图1、2、3) 2.2结肠癌组织中的Sm