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陇东学院生命科学与技术学院 本科学士学位论文开题报告 题目：大肠杆菌噬菌体生理特性的研究 学 院：生命科学与技术学院 专 业： 生物科学 班 级： 10级生科（1）班 姓 名： 郑小云 指 导 教师： 毛宁 2013 年 5 月 20日 大肠杆菌噬菌体生理特性的研究 一、选题的目的和意义[1]。噬菌体作为指示微生物，在监测水质环境、指示污染程度等方面的研究有非常重要的作用[2]。因此，分离和研究噬菌体，弄清噬菌体与其宿主之间的生态学关系，对于监测水质环境，控制水质污染等方面的工作无疑具有重要指导意义。 大肠杆菌噬菌体，是指寄生在大肠杆菌内的一种噬菌体，属于细胞病毒的一种，具有专一性,一种噬菌体只在一种细菌中生活,而不能在另一种细菌中生活。它主要存在于一些动物的粪便和污染水源中，肠出血性大肠杆菌引起的疾病症状包括腹部绞痛和腹泻，一些病例可能发展为血性腹泻（出血性大肠炎）。潜伏期3至8天，平均为3至4 天。大多数病人10天内康复，但是有少数病人（特别是幼儿和老年人）的染病可能发展为威胁生命的疾病，例如溶血尿毒综合症（HUS）[3]。 大肠杆菌噬菌体是一种可以感染大肠杆菌并且在大肠杆菌体内复制繁殖的病毒，当其感染大肠杆菌后，便会破坏大肠杆菌的细胞结构以及引起细菌致死，待大肠杆菌死亡之后，繁殖的大量噬菌体便会冲破死亡大肠杆菌，再去感染别的大肠杆菌，最终引起大肠杆菌的大范围死亡。鉴于噬菌体有溶菌作用[4]和严格的种型特异性，可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型，亦可用于检测标本中的未知细菌和防治某些传染病。噬菌体作为一种新的治疗制剂已受到广泛关注[5]，本试验旨在通过分离大肠杆菌噬菌体, 研究其生理特性，为噬菌体作为一种生物制剂用于治疗细菌性感染提供实验依据，为预防和治疗大肠杆菌感染引起的疾病探索一种有效的方法。 2、选题意义 本研究旨在探索大肠杆菌噬菌体的基本生理特性，及大肠杆菌噬菌体与大肠杆菌的寄生关系。对于利用大肠杆菌噬菌体治疗大肠杆菌引起的疾病方面的研究提供实验依据，为大肠杆菌感染患者做出一份贡献，有助于其早日康复。 通过本试验，让我将所学的生物专业课程应用到实验中去，在实验过程中总结和运用四年所学的知识；同时也通过实验过程复习有关实验的基础知识和基本操作方法，锻炼实验操作能力，为以后工作打下坚实的基础。 二、选题的依据 大肠杆菌噬菌体是一类寄生于大肠杆菌体内的病毒，其个体形态极其微小，噬菌体具有非常专一的寄生性，它只能在特异的寄主细胞中增殖。另外，噬菌体缺乏独立代谢的酶体系，不能脱离寄主而自行繁殖。因而噬菌体的繁殖必须依赖于寄主细胞的繁殖，它只能在活的、正在繁殖阶段的细胞中繁殖；而在死的、衰老的、处于休眠状态的细胞中，或在代谢产物或培养基上均不能繁殖。为此，必须采用特殊的方法对噬菌体进行分离检查。当烈性噬菌体侵染大肠杆菌后会迅速引起敏感大肠杆菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑─噬菌斑。噬菌体的效价即1ml样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一般采用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清晰度高，故计数比较准确。 Ca2+和Mg2+能够促进噬菌体的吸附与注入[6]，有利于噬菌体的繁殖，对促进噬菌体的形成有明显效果，所以在培养基中添加Ca2+和Mg2+时，可以提高噬菌体的出斑率。 三、国内外研究概况 英国细菌学家和内科医生Frederick Twort和法裔加拿大细菌学家Flix DHerelle分别在1915年和1917年独立发现了噬菌体，不久之后就用来治疗感染性疾病。Dherelle最早从来自痢疾的临床样本研究中观察到噬菌体滴度的增加正好伴随着病人的康复过程。他将噬菌体称为“外源性免疫因子”[7] 。1934年美国科学家报道了利用噬菌体疗法治疗肠球菌感染的成功率可达80% [8] 。但随着抗生素的成功推广应用，二次世界大战之后美国和西欧的大多数国家都终止了噬菌体制剂的研制。近年来细菌耐药性问题不断突现，用抗生素治疗细菌感染面临巨大的挑战，一些科学家和临床工作者开始重视噬菌体制剂的研制。研究者Harper解释了为什么噬菌体疗法现在又被重新使用起来了，因为每一个噬菌体对某种类型的细菌有高度的特异性，而且它们需要正确的宿主细胞才能够进行复制。靶细菌越多，噬菌体的繁殖速度越快，越能在最短时间内杀死细菌。因此用噬菌体来治疗大量细菌的感染性疾