南医生化实验4技术报告.docVIP

生物化学实验报告 一、实验目的实验原理材料与方法肝糖原的定量测定 取3支试管，按下表操作： 试剂（ml） 空白管 标准管 样品管 蒸馏水 1.0 -- -- 标准葡萄糖溶液 -- 1.0 -- 糖原提取液 -- -- 1.0 0.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5 混匀后，沸水浴10min，冷却。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。 四、结果与讨论测定次数 空白管 标准液 样品液 1 0 0.793 0.190 2 0 0.794 0.192 3 0 0.794 0.191 各管平均值A620 0 0.794 0.191 根据公式：肝糖原（g/100g肝组织）=A样品/A标准 0.05×100/肝组织重(g)×100/1000×1.11 得本组实验：肝糖原=0.89g/100g肝组织 故本次实验结论为：该鸡肝样品含有肝组织，且肝糖原含量为0.89g/100g肝组织。 结果分析 经查阅资料得：饱食鸡肝的肝糖原含量为：2～3g/100g肝组织 而本组实验测得肝糖原=0.89g/100g肝组织，即本次实验测得的肝糖原含量偏低。 3.讨论总结 经查阅资料和与搭档讨论得以下注意事项： （1）试剂中有强酸、强碱，如蒽酮试剂是用浓硫酸配制的，具有强腐蚀性，故操作中要注意安全； （2）0.2%蒽酮溶液和30%KOH 1.5ml 应用刻度吸管移取，可减少实验误差，比起使用微量加样枪操作也更安全，避免损毁微量加样枪； （3）比色皿盛装溶液体积不得超过比色皿2/3，防止溶液溢出，腐蚀比色杯架； （4）肝组织必须在沸水浴中全部溶解，否则将影响比色； （5）使用离心机前一定要配平，否则会损坏离心机； （6）糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后若出现黑色浑浊，则是因为班氏试剂过量所致； （7）蒽酮试剂必须2倍于被测液； （8）沸水浴时，注意打开方式，避免烫伤； （9）糖原提取并转移到100ml容量瓶中进行样品糖原溶液配制时必须注意仔细定容，以免导致稀释倍数过大，导致实验误差； （10）肝糖原提取时，向上清液中加入等量的95%乙醇后，务必混合均匀。由于上清液为水溶液，比重＞95%乙醇，溶液分为两层。加之上清液容积较大，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀； （11）实验材料应选取饱食鸡肝，否则所测肝糖原含量会偏低。 用托盘天平称取1.50g的鸡肝，剪碎； 加入5%CCl3COOH 1 ml，研磨至乳状； 加入5%CCl3COOH 3 ml，研磨成肝匀浆； 将肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）； 弃去沉淀，取上清液3ml； 滴加3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟； 离心5分钟（4000 r / min）； 弃去上清液，往沉淀中滴加1ml蒸馏水； 沸水浴2分钟，使沉淀溶解； 得糖原溶液1ml，滴加5滴浓HCl； 白瓷板孔穴中 沸水浴15min，冷却； 加碘试剂2滴 加糖原溶液2滴 加碘试剂2滴 滴加5滴50%NaOH溶液； 呈色反应 得到糖原水解液。 取糖原水解液2滴，滴加4滴班氏试剂； 沸水浴2min，观察变化。 用托盘天平称取0.15g的鸡肝； 沸水浴15min； 冷却，全部转入100ml容量瓶中； 加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液； 肝糖原的定量测定。