专题1微生物的培养与应用技术报告.docVIP

专题1 微生物的培养与应用 培养基种类 特点 用途 物理性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类、鉴定 固体培养基 加凝固剂，如琼脂 微生物分离、鉴定、活菌计数 化学组成 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确（用化学成分已知的化学物质配成） 分类、鉴定 目的用途 选择培养基 培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 培养、分离出特定微生物 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物 ? 【培养基】：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 【培养基的成分】包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 、生长因子等。 ·【碳源】：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·【氮源】：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 【生长因子】微生物生长繁殖必需的微量有机物，如维生素、氨基酸、碱基等。 【培养基的配制原则】： （1）根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基 （2）营养成分的恰当配比 （3）渗透压、PH等 【培养基的配制步骤】： ①称量 ②溶化 ③调pH ④培养基的分装 ⑤加棉塞 ⑥包扎·灭菌 【制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤】 计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板。 消毒与灭菌的区别 比较项目 消毒 灭菌 条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素 结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等 常用方法 煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6 min）、巴氏消毒法（如在80℃，煮15 min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 ? 三种常用灭菌方法的比较 灭菌方法 灭菌条件 灭菌时间 适用材料或用具 灼烧灭菌 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 接种环、接种针或其他金属工具 干热灭菌 干热灭菌箱内，160～170℃ 1～2 h 玻璃器皿（吸管、培养皿） 和金属用具等 高压蒸汽灭菌 100kPa，121℃ 15～30 min 培养基等 ? 4无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 5、微生物的纯化培养 包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段，纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。 【平板划线法】： 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，就可以得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 【稀释涂布平板法】： 将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 ? 6、微生物的分离——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （1）实验室中微生物的筛选应用的原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 （2）选择性培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 （3）配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 实验步骤 ①土壤取样：?从肥沃、湿润的土壤中取样。 ②制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。 牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判