专题2微生物的培养与应用技术报告.docVIP

专题2 微生物的培养与应用最基本的微生物技术培养基的制备高压蒸汽灭菌和干热灭菌倒平板操作平板划线操作和稀释涂布平简述纤维素酶的种类及应用价值。 掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌平板划线法稀释涂布平板法等基本操作技术运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物的分离与培养等实际问题。培养学生良好的科学态度与习惯。 、 三、复习策略： 1、本专题的3个课题中，课题1介绍了最基本的微生物技术培养基的制备高压蒸汽灭菌和干热灭菌倒平板操作平板划线操作和稀释涂布平板法应用选择培养基分离某种特定的微生物（课题2和课题3）本专题中所强调的无菌操作技术，将有助于“专题3 植物组织培养技术”的顺利完成。（一）培养基不同的微生物需要采用不同的培养基配方尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。 ①目的要明确:目的包含两层含义，一指培养的微生物种类、二指培养的目的，是用于生产还是科学研究，因为二者对培养基的化学成分、物理状态等方面要求不同，例如用于生产的培养基应具有原料易得、价格低廉、配制方便等特点，而用于科学研究的培养基应具有成分含量准确，可多次重复实验的特点。 ②营养要协调:它表现在两个方面，一是营养物质的浓度要适宜，二是营养物质间的浓度比例要适宜。 ③pH要适宜：由于微生物在生长代谢过程中营养物质利用和代谢产物的形成往往会改变环境中的pH，为了维持培养基中出的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，最常用的缓冲剂是磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。 2、培养基配制的程序及注意事项 计算→称量→熔化 →调PH →灭菌 → 倒平板 ①全程要求无菌操作，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。使锥形瓶的瓶口通过火焰通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 平板冷凝后皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。在倒平板的过程中，培养基溅在皿盖与皿底之间的部位空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 按培养基物理性质划分: 名称 特征 功能 固体培养基 外观显固体状态的培养基 主要用于微生物的分离、鉴定 液体培养基 呈液体状态的培养基 主要用于工业生产 按培养基的化学成分划分 种类 特征 用途 天然培养基 用化学成分不明确的天然物质配成 主要用于工业生产 合成培养基 用化学成分已知的化学物质配成 主要用于微生物的分类、鉴定 按培养基的功能分 种类 制备方法 原理 用途 例 选择培养基 培养基中加如某种化学成分 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基 使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 鉴别培养基 加如某种试剂或化学药品 依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计 鉴别和区分菌落相似的微生物 伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌 （二）微生物的纯化培养（两种接种方法） 1、平板划线在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高，杀死菌种。 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。涂布平板涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；—300个之间的平板进行计数，且重复组结果要有相近性。 3、评价和分析实验结果 ①培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 是否进行了及