生物化学DNA的生物合成资料.ppt

原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 ori ter E.coli 82 32 ori ter SV40 50 0 三、复制的终止 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 子链中的RNA引物被取代 真核生物DNA生物合成过程 The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes 第 四 节 (自学为主) 真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse HⅠ和FEN1等。 真核生物与原核生物DNA复制的差异： 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 一、真核生物复制的起始与原核基本相似 增殖细胞核抗原（PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象。 DNA-pol δ和pol α分别兼有解螺旋酶和引物酶活性。在复制叉及引物生成后，DNA-pol δ通过PCNA的协同作用，逐步取代pol α，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成领头链。随从链引物也由pol α催化合成。然后由PCNA协同，pol δ置换pol α，继续合成DNA子链。 二、真核生物复制的延长发生DNA聚合酶α/δ转换 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 后随链 引物 核小体 三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题 端粒酶：由RNA与蛋白质组成，具逆转录酶活 性，以自身RNA为模板合成端粒DNA。 （TTAGGG）n 末端DNA序列： 端粒（Telomere） ：是真核生物染色体线性DNA分子末端的一种特殊结构。 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 端粒酶催化作用的爬行模型 真核所有染色体DNA复制仅仅出现在细胞周期的S期，而且只能复制一次。 五、真核生物染色体DNA在每个细胞周期中只能复制一次 逆转录和其他复制方式 Reverse Transcription Other DNA Replication Ways 第五节 双链DNA是大多数生物的遗传物质。某些病毒的遗传物质是RNA。原核生物的质粒，真核生物的线粒体DNA，都是染色体外存在的DNA。这些非染色体基因组，采用特殊的方式进行复制。 逆转录酶(reverse transcriptase)：依赖RNA的DNA聚合酶(RNA-dependent DNA polymerase, RDDP) 逆转录(reverse transcription):是一种依靠逆转录酶以单链RNA为模板合成双链DNA的过程。 逆转录酶 一、逆转录病毒的基因组是RNA，其复制方式是逆转录 逆转录酶是多功能酶，有三种酶活性： 1. 逆转录活性：即以RNA为模板合成DNA 2. RNA水解酶活性：水解RNA:DNA中的RNA 3. DNA pol活性：以DNA为模板合成DNA 逆转录病毒细胞内的逆转录现象: RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA: cDNA ?complementary DNA? 逆转录酶 A AA A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 二、逆转录的发现发展了中心法则 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 自主学习 1、逆转录的概念，基本过程。 2、端粒有何作用？为何有些肿瘤的发生与端粒有关？ 人有了知