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基因工程(geneticengineeringmicroganism, GEM)的开发。 Charkrabarty(1998)发现能降解芳烃的细菌,其降解基因位于质粒上。他利用基因工程的手段将多种质粒嫁接到一种菌体内,构成一菌多基因,可以同时降解四种石油组分,能把原油中约2/3的烃类消耗,突出特点是比自然菌降解速度快。 (1) 要对污染地点和存在的污染物进行详细的具体考察,一些土壤中可能不宜使用; (2) 受各种环境因素的影响大; (3) 特定的微生物只降解特定类型的化合物质,状态稍有变化的化合物就可能不会被同一微生物酶所破坏; (4) 修复的时间相对较长; (5) 当污染物浓度太低,不足以维持降解细菌的群落时,残余的污染物就会留在土壤中。 3.5 ISB的局限性 (1) 实行有效的生物修复计划时需要采取的步骤; (2) 确定生物修复技术彻底降解污染物所需要的运 行周期; (3) 监测生物修复计划的进展和污染物降解的过程; (4) 如何通过大量的现场试验获得可信的实际应用 数据跟踪和记录; (5) 土壤的生物修复计划是否会造成新的污染或导致污染物的扩散。 3.6 研究工作方向: 石油污染土壤菌剂修复实验报告 概况: 沈抚灌区土壤以石油烃类污染为主,污灌年限长,流量大,面积广,难降解有机污染物(PAHs)含量高,这在国内外都非常少见,迫切需要经济、有效、易于操作的土壤原位生物修复综合技术。 研 究 意 义: 本部分研究以微生物实验为基础,筛选污灌土壤中解脂酶活性强的优势微生物,人工接种培养,配制成固体菌剂,分别接种在田间和网室布置的微区和盆栽,以不同经济作物进行试验。本文是2001年的实验布置和研究进程,主要探讨菌剂施加的方法与条件,实现研究成果产业化,这在治理大面积污灌土壤上具有重要意义。 实验内容 田间试验 在污染现场设置试验微区,以观测不同处理的生物修复在自然条件下情况变化。 网室盆栽实验 正交实验 油浓度实验 菌剂实验 实验准备 固体菌剂 从灌区土壤中筛选出优势的土著微生物,包括细菌,真菌,共17株菌种,选择降解能力强的微生物,经过三级培养制成固体菌剂。 细菌菌剂:①芽孢杆菌②动胶菌属③C2④C4⑤白色未鉴定 数量:9.51×1014(个/g) 真菌菌剂:①小克银汉②棕曲霉③毛霉④B5⑤B6⑥B10⑦山大提供的黄孢原毛平革菌 数量:4.39×109(个/g) 联合修复方式 目的:考察不同经济作物(黄豆、玉米、蓖麻、沙打旺)的修复情况。 处理方法:均投加有机颗粒复合肥1.43kg(0.167%)+细菌菌剂0.72kg(0.08%)+真菌菌剂0.72kg(0.08%) 测定方法:微生物数量采用平板计数法,有机物含量用重量法。 分析: 1.对于四种作物,根际微生物数量之间存在数量级的差异。 细菌数量为:沙打旺=玉米黄豆=蓖麻 真菌数量为:玉米﹥沙打旺﹥蓖麻﹥黄豆 四种作物根际土壤中依次相差一个数量级 2.同对照比较起来 蓖麻根际细菌数量相差不大,而真菌数相差了两个数量级; 黄豆根际细菌数量无差别,真菌数处理比对照低; 沙打旺根际真菌处于同一数量级,细菌则比对照高一个数量级。 玉米真菌和细菌都较对照高。 3.土壤中总烃含量的数值表明,玉米和沙打旺对石油降解的能力强。 还需要进一步测定PAHs的含量变化。 ? 又以灌区植物玉米为例,分为三种处理: 1.营养调节: 2.菌剂调节:在投加0.5%的肥料基础上,分别施加不同比例的细菌和真菌菌剂 3.联合修复:投加0.5%肥料+0.25%细菌菌剂+0.25%真菌菌剂 以空白土壤为对照 ? 结果: 1 肥料的施加对微生物数量有提高作用,且随肥料的投加量增加而增加,但对石油的降解却存在一定的界限。 2 施加菌剂 真菌菌剂量少则细菌数量多,但真菌菌剂量多却抑制了细菌,且对石油降解效果不如其它处理; 细菌菌剂施加量不同对微生物数量都有促进作用且数量级较高。 3 联合修复中,细菌数量最大,真菌数量级不高,且总烃量残余较高。 玉米 株高(cm) 百粒重(g) 产量(kg/株) 1 134.8 14.765 33.33 2 189.5 28.195 118.75 3 190.3 31.53 4
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