三DNA与RNA分析方法资料.ppt

溴酚蓝的分子量为670，在不同浓度凝胶中，迁移速度基本相同，它的分子筛效应小，近似于自由电泳，故被普遍用作指示剂。 在0.6％、1％、2％的琼脂糖凝胶电泳中，溴酚蓝的迁移率分别与1kb、0.6kb和0.15kb的双链线性DNA片段大致相同。 在5％的聚内烯酰胺凝胶和7－8mol/L尿素PAG中，分别与65mer和35mer的寡聚核苷酸迁移率相同。 二甲苯青的分子量为554.6，携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中迁移率比溴酚蓝慢，在5％PAG含7—8mol/L 尿素PAG的胶中迁移率分别相当于260mer和130mer的寡核苷酸。 根据分离样品中DNA分子的大小，可以参照指示剂 Bb 和Xc的迁移情况决定是否停止电泳指示剂。一般加在电泳上样缓冲液中，为了使样品能沉入胶孔，还要加入适星的蔗糖、聚蔗糖400或甘油以增加比重。 2. 聚丙烯酰胺凝胶的制备 原 理： 由过硫酸铵提供并可被TEMED（N’, N’, N’, N’-四甲基乙二胺）所稳定的自由基引发的一个链式反应,使丙烯酰胺单体聚合成长链。双功能基团N,N’-亚甲基双丙烯酰胺参与聚合反应时，链与链之间铰链成凝胶，其孔径由链长和交联度决定。 * 使用 TBE电泳缓冲液 * 凝胶在垂直装置中制备 聚丙烯酰胺凝胶形成过