2014植物组织培养复习技术方案.docVIP

名词解释 1.植物组织培养：植物组织培养是指在无菌条件下将离体的植物器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体进行培养使其再生细胞或完整植株的技术。 2.外植体：植物组织培养中，使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。 3.愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 4.异质性：是指性质上的多样性或缺乏一致性的不同成分的组合。异质性是生物在自然界中的共同特征之一，也是生物在自然界中存活的重要保证，异质性是达尔文进化论及物种多样性的基础。 5. 褐变：是指外植体在诱导脱分化或再分化过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色的物质，以致培养基逐渐渐变成褐色，外植体也随着进一步变褐而死亡的现象。 6. 玻璃化现象：一种生理性病害，是植株在离体培养过程中出现的异常现象，包括茎叶半透明、海绿色、水浸状或玻璃化等现象。 7.胚培养：是指对胚、子房、胚珠、胚乳进行离体培养，发育成完整植株的技术。 8.体外受精：是指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术，称为体外受精。 9.种质资源的离体保存：指对离体培养的小植株、器官、组织、细胞或原生质体等材料，采用限制、延缓或停止其生长的处理使之保存，在需要时可重新恢复其生长，并再生植株的方法。 简单、综述题 1.植物组织培养的主要特点 ①整个过程都是在无菌条件下进行的②在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的，因此，在组织培养中的植物材料不需依靠自身的光合作用制造养分，而是处于完全的异养状态。③起始材料可以是植物的器官、组织，也可以是单个的细胞，它们都处于离体状态下。④组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，形成克隆。⑤是在封闭的容器中进行的，容器内气体和环境气体可以通过瓶塞或其他封口材料进行交换。 ⑥环境温度、光照强度和时间等都是人为设定的。 2. 培养基配制 （1）如何配置培养基？ ①取出培养基，按1、2、3······顺序从左到右排放好。②取一个容器放在台面上，称取琼脂、蔗糖倒进容器。③取1/3蒸馏水放入容器，按顺序分别放入母液1、2、3······。④初步定容⑤将容器放入微波炉，让琼脂彻底溶解，再一次定容。⑥调解PH值（NaOH或盐酸）至中性，分装培养基，封口。⑦灭菌（121℃、15～20min）⑧灭菌后待温度降到40℃左右以下时，取出，加生长调节剂。 （2）如何配出母液？ 通常母液的浓度需要是培养基浓度的若干倍（10倍、100倍或更高），配制母液时需用蒸馏水。 ①确定培养基②按照扩大倍数分别称量各元素表中的各化合物③分别充分溶解（溶解时溶剂不能太少也不能太多，太少会导致溶液浓度太大，易产生沉淀，太多可能会会超过定容刻度线，导致溶液浓度不准确。）④按一定顺序分别倒入容量瓶混合⑤定容⑥母液分装（大量元素、钙盐、微量元素、铁盐、有机元素）⑦贴标签，保存于冰箱中（2～4℃） 3.商业化生产中应注意的问题及控制措施？ （1）遗传稳定性问题 提高稳定性、减少变异发生的措施： ①减少继代次数，缩短继代时间②定期检查，剔除形态异常和生理异常苗③使用生长点和胚状体方式扩大繁殖④减少培养基中诱变因素和一些化学物质⑤尽量促进再生植株开花结实，以检查其生物学性状和经济性状是否稳定 （2）玻璃化问题 解决玻璃化现象的措施： ①增加琼脂浓度，减少水分吸收②增加蔗糖含量及加入渗透剂，降低培养基水势 ③减少培养基中的N含量④增强容器通风，降低瓶内湿度及乙烯含量⑤增强光照，适当降低培养室内温度⑥加入适量ABA 4. 降低成本提高效率的措施？ ①提高劳动生产率、节约工资②减少设备投资、延长使用寿命③降低器皿消耗、采用代用品④节省水电开支 A尽量利用自然资源B充分利用培养室空间C减少水的消耗节省电能⑤降低污染率、减少次品、杜绝废品⑥提高繁殖系数和移栽成活率⑦简化培养基⑧发展多种经营、开展横向协作 5.如何控制污染？ ①接种室的消毒：要用拖布清扫地面，酒精消毒操作台，用紫外线消毒15min，切断电源后5min方可进入工作室内； ②无菌操作要求：工作试验人员要用肥皂洗手，并用干抹布擦干净，若手上有水分则用酒精清洗，使其水分挥发； ③材料的切割、分离、接种：材料和实验工具在使用前要进行消毒处理，双手避免交替使用，分工明确，材料消毒要先放置在水中浸泡，在用镊子取出放入Hgcl消毒液中。依次进行，一般放置位置与母液放置位置相反。接种时要求接种瓶倾斜45度。封盖。 6.商业型实验室设计：①②③④⑤⑥⑦⑨ 植物组织培养实验室通常包括：准备室、无菌操作室、培养室、温室。配有无菌操作设备、培养设备、药品储存、配制仪器设备、察分析