分子生物学考试要点讲解.docVIP

第一二章遗传物质的分子本质 基因工程:分、切、接、转、筛 遗传物质的发现：肺炎双球菌的体内转化实验（格里菲斯） （a）将光滑型肺炎双球菌注入小鼠体内，使小鼠致死。（b）将粗糙型肺炎双球菌注入小鼠体内，对小鼠无害。（c）将光滑型肺炎双球菌加热杀死后，再注入小鼠体内，对小鼠无害。（d）将加热杀死的光滑型肺炎双球菌与粗糙型肺炎双球菌一起注入小鼠体内，小鼠死掉。放射性同位素35S标记蛋白质，32P标记DNA15N为唯一氮源的培养基上连续培养，使细胞内的DNA两条链上的14N被15N取代，收集菌体，一部分用于抽取DNA，一部分放在14N为氮源的培养基中继续培养一代，一部分提取DNA，另一部分继续培养，再提取DNA,用CsCl密度梯度离心的方法，发现0代为一条高密度带，两条链上的N原子全部是15N，第一代为中密度带，第二代中有中密度带和低密度两条带。 DNA的提取：1. 细胞裂解2. 去除蛋白等杂质（酚：氯仿：异戊醇25:24:1）3. 沉淀DNA（乙醇，异丙醇）4. 风干DNA5. 溶解DNA 细胞破碎：①机械方法：超声波处理法、研磨法（植物叶）匀浆法（动物组织）； ②化学试剂法：用SDS、CTAB（植物组织）； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。 DNA的测序：Sanger的双脱氧终止法 核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为5’端，以双脱氧碱基为3’端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后，分四个泳道进行电泳。以分离长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段3’端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。双链DNA在多种酶的作用下可以变性成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据复制成同样的两分子挎贝。 转座成分or 移动基因:是一些可以在染色体基因组上从一个位置转移到另一个位置，甚至在不同染色体之间跃迁的DNA成分。有人将之形象地称为跳跃基因。（Ac/Ds因子） Ac-Ds系统 玉米糊粉层颜色的控制涉及多对相关基因。C基因为野生型时，胚乳呈紫色，若C基因突变为c阻断了紫色素的合成，那么胚乳为白色。在胚乳发育过程中，若突变发生回复则导致产生斑点，回复突变发生得越早，产生的紫斑就越大，发生得越晚，则产生的紫斑就越小。McClintock认为突变基因c(无色)是由一个可移动的控制因子(controlling element)(现称转座子)引起的，称为解离因子(dissociator，Ds)，它能合成转座酶，它可以插入到基因C中，即转座。另一个可移动的控制因子是Ac，称激活因子(Activator)，它的存在可以激活Ds转座进入C基因或别的基因，也能使Ds从基因中转出，使突变基因回复。这就是Ac-Ds系统。 断裂基因：在编码序列中间插有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，这些间隔区称为内含子；而编码区则称为外显子。含有内含子的基因称为不连续基因或断裂基因。（内含子并非都含而不显，外显子并非都显） 假基因：是一些核苷酸序列与其相应的正常功能基因基本相同、但却不能合成出功能蛋白质的失活基因。（人类珠蛋白） 重叠基因：核苷酸序列是彼此重叠的的基因称为重叠基因或嵌套基因。 基因按其产物的功能可分为结构基因、调控基因和RNA基因。 结构基因：可被转录形成mRNA，并进而翻译成多肽的基因。 调控基因：指某些可调节控制结构基因表达的基因。 RNA基因：是一些只转录不翻译的基因，包括核糖体RNA基因，专门转录rRNA；以及tRNA基因，专门转录tRNA。 C值：生物体的单倍体基因组所含DNA总量称为C值。 C值矛盾：生物体的复杂性与DNA含量并不总是正相关。 N值矛盾：生物体的复杂性与基因数之间并不总是正相关。 原核生物的基因组包括两类DNA分子，染色体—携带细胞生存和繁殖所需的全部遗传信息，质粒—染色体以外独立存在的DNA分子。 操纵子(operon)：功能上相关的几个结构基因前后相连，由一个共同的调节基因和一组共同的控制位点，即启动子(promoter)和操作子(operator)对其表达过程实行协同调节控制。细菌基因表达调控的这样一个完整的单元，称为操纵子。 质粒DNA：细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子，能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。现在常用的质粒大多数是经过改造或人工构建的，常含抗生素抗性基因，是重组DNA技术中重要的工具。 基因家族：真核生物基因组中，来源相同、结构相似、功能相关的一组基因。如人类α珠蛋白和类β珠蛋基因家族。 根据基因家族成员的