高三生物知识梳理导学案4.docVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 【高考目标导航】 1、蛋白质的提取和分离 2、PCR技术的基本操作和应用 【基础知识梳理】 一、DNA的粗提取与鉴定 1、实验原理：DNA与杂质的溶解度不同，DNA与杂质对酶、高温、洗涤剂的耐受性不同 2、实验设计： ①实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大，如鸡血、菜花、洋葱等。 ②破碎细胞：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，用纱布过滤后收集滤液即可。 ③去除滤液中的杂质：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 ④DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 ⑤DNA的鉴定：取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 二、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1、PCR原理：DNA的热变性 2、PCR反应过程 （1）变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链 （2）复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 （3）延伸：温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸（A,T,C,G）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 三、血红蛋白的提取和分离实验 1、方法及原理 方法 原理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质 2、操作程序： （1）样品处理： 红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液 （2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 （3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 （4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80℃~100℃高温解旋，双链分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相同点 （1）需提供DNA复制的模板 （2）四中脱氧核苷酸作原料 （3）子链延伸的方向都是从5ˊ端到3ˊ端 （4）都需要酶的催化 【要点名师透析】 一、DNA和蛋白质的技术 1、比较细胞内DNA复制与DNA扩增（PCR） 2.血红蛋白的提取和分离方法 (1)凝胶色谱法 ①含义：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法。 ②原理 a.相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。 b.相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 (2)电泳法 ①含义：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 ②原理：利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异和分子本身大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 (3)缓冲溶液 ①组成：1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。 ②作用：在一定范围内抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，确保实验室条件下能准确模拟生物体内的代谢过程。 【感悟高考真题】 1、（2011·江苏高考）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是() A.用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B.调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C.将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D.用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 【解析】A项，用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol／L,使DNA析出。B项，NaCl溶液为2mol／L，过滤除去不溶的杂质，木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。C项，在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。D项，如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 【答案】B 2、（2010·广东高考）新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是 PCR技术——扩增蛋白质 B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体 C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒 D.