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三联体密码的破译 二、密码子的确定与密码表 Nirenborg 1961开始，1965完成。 1）用随机多核苷酸顺序确定，体外翻译 2）用tRNA-AA-核糖体结合法确定 3）用重复序列多核苷酸确定。 结果：密码表 密码子的方向：5’ ?3’ 缺失或插入核苷酸引起三联体密码的改变 以均聚物为模板指导多肽的合成 以特定的共聚物为模板指导多肽的合成 核糖体结合技术 1. 通用性(universal) 蛋白质生物合成的整套密码，从原核生物到人类都通用。 已发现少数例外，如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。 密码的通用性进一步证明各种生物进化来自同一祖先。 2. 简并性(degeneracy) 遗传密码的简并性 3. 连续性(commaless) 5. 摆动性(wobble) （变偶性） 密码子与反密码子的配对关系 密码子、反密码子配对的摆动现象 二、tRNA (1)被氨酰-tRNA合成酶识别，专一运载氨基酸（氨酰基） (2)反密码子,识别mRNA链上的密码子 (3)连接多肽链与核糖体 （4）tRNA与mRNA之间存在变偶性：一种tRNA可以识别一种以上的同一氨基酸的密码子。 真核和原核细胞参与翻译的蛋白质因子 活化有两个意义: 1.? AA只有与自已相对应的tRNA连接，才能运转至核糖体,才能识别mRNA上的密码子。运输与识别，保证合成准确性。 2.? 氨酰键储存了能量，具有相当高的转移势能,用于以后肽键的形成。作为中间产物降低了形成肽键的能障。? 氨基酸的活化 催化氨基酸与tRNA结合生成氨基酰-tRNA 具有绝对专一性： 对氨基酸及tRNA都能高度特异识别 具有校正活性(proofreading activity) 氨基酰-tRNA的表示方法 真核生物 起始 Met-tRNAi Met 中间 Met-tRNAmMet 两种tRNA者都带有相同的反密码子3’UAC5’, 如何识别起始和内部的AUG ？ 1）核糖体小亚基内16S rRNA 的3`与mRNA起始密码子AUG上游一段有互补的SD序列即AGGAGGU。 即：16S rRNA起着识别、选择起始密码子的作用。 2）转甲酰酶只能催化Met-tRNAf fMet甲酰基化。 3）fMet的-NH2甲酰基化，不能与前一个AA形成肽键，不可能在肽链中间出现。 1. 30S-mRNA复合物的形成 (1) 核糖体分解成30S、50S两个亚基； (2) IF3与30S亚基结合，使30S与50S不能结合; (3) 30S.IF3结合到mRNA上,使AUG正确定位于P位内,形成30S.IF3-mRNA复合物 (4）mRNA的SD序列与16S rRNA 3’互补,确定起始AUG。 肽链合成的起始 Tu\Ts循环 肽键的形成 4.脱落 露出核糖体的空载tRNA从mRNA上脱落。 肽链的延长 肽链合成的终止及释放 多多核糖体与核糖体循环 肽 链 的 折 叠 胰岛素原的加工 蛋白质定位 信号肽假说简图 一些真核细胞多肽链上N-端的信号肽的结构 带有导肽的线粒体蛋白质前体跨膜运送过程示意图 信号肽 多肽链中用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列 。 分泌蛋白质的合成和胞吐作用 2. 转肽：肽键的形成 氨酰-tRNA进入核糖体A位以后,P位与A位均被占满：P（fMet-tRNAffMet) A(AA2-tRNAAA2) P位的fMet-fRNAfMet上的fMet在肽基转移酶的作用下转移到A位上的AA的氨基上,从而形成第一个肽键。 结果: A位上形成一个二肽基-tRNA, P位是空载的tRNAffMet (空的起始tRNA） 3. 移位 EF-G、GTP与核糖体结合推动核糖体沿mRNA 5’→3’方向移动一个密码子的距离. 结果： 二肽基tRNA从A位进为P位,仍与mRNA结合； 原来在P位中的tRNAffMet便离开P位露出； mRNA上的下一个(第3个）密码子恰好处于核糖体的A位,供下一个氨酰-tRNA的进位。 EF-G也称移位酶，消耗1个GTP。 1 2 1 2 2 3 2 3 进位 肽键形成 移位 进位 (Tu\Ts) GTP GTP N-端 2 3 5′ 3′ C-端 肽键形成 1 5′ 3′ （EF-G） 三、肽链合成的终止及释放 当核糖体沿mRNA移动至终止密码子(UAA、UAG、UGA)进入A位时，再没有氨酰-tRNA进位，肽链的延长停止。 终止因子: RF1, 识别UAA、UAG RF2, 识别UAA、UGA RF3与GTP