C凝集反应zx解读.ppt

免疫电泳技术类型 对流免疫电泳（CIEP）：双向扩散 + 电泳 火箭免疫电泳（RIE）：单向扩散 + 电泳 免疫电泳（IE）：区带电泳 + 免疫双扩散 免疫固定电泳（IFE） ：区带电泳 + 免疫沉淀 一、 对流免疫电泳 (counter immunoelectrophoresis,CLEP) 【原理】定向加速电泳+双向免疫扩散 抗原：置阴极，通电后向阳极泳动 抗体：解离少，分子量大，加上电渗作用， 负极泳动。 pH8.4 结果分析： 无沉淀线出现则表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。 对流免疫电泳 （1）简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍，可测蛋白质浓度达 ug/ml。 （2）要求抗原、抗体比例严格，尽可能使用高效价免疫血清，必要时对待检样品采用不同稀释度 （3）不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 （4）由于电渗的缘故，目前已不推荐使用。 【 CIEP方法评价】 二、 火箭免疫电泳 （rocket immunoelectrophoresis,RIE） 【原理】电泳+单扩 定量检测技术 含抗体的凝胶 加入抗原 若抗体浓度保持不变，峰的高度与抗原量呈正比，抗原含量越高，火箭峰越长；反之亦然。 （1）? 定性：直接观察、染色 （2） 定量：根据峰高-浓度标准曲线计算 （3）为提高灵敏度，可加入少量125I标记的标准抗原共同电泳，则可在含抗体的琼脂中形成不可见的火箭峰，采用放射自显影技术。根据自显影火箭峰降低的程度（竞争法）可计算出抗原的浓度。 【结果判定】 1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。 3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），抵消了电渗作用。 【影响因素】 由于电渗的缘故，目前已不推荐使用。 免疫电泳 （immunoelectrophoresis,IE） 【基本原理】区带电泳 + 免疫双扩散 沉淀弧 1. Ag分离 2. 槽内加入抗血清（Ab） 沉淀弧 3. Ag-Ab扩散和沉淀 - + 免疫电泳示意图 【方法评价】 （1）分辨率高 （2）仅定性 （3）耗时（18~24h）、结果不易分析 （4）沉淀线的数目和分辨率受许多因素影响。 （5）目前大量应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常体液蛋白的识别等方面。 四、免疫固定电泳（immunofixationelectrophoresis，IFE） 【原理】区带电泳 + 免疫沉淀 类似免疫电泳，不同之处是将抗血清直接加于电泳后蛋白质区带表面，或将浸有抗血清的滤纸贴于其上，抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的复合物嵌于固相支持物中。 四、免疫固定电泳（immunofixationelectrophoresis，IFE） 【原理】区带电泳 + 免疫沉淀 将未结合的游离抗原或抗体洗去，则仅保留被结合固定的某种蛋白。因不同抗原电泳移动距离不同，染色后通过着色带了解到某一抗原的存在。 区带电泳支持物选用滤纸、醋纤膜、琼脂或聚丙烯酰胺皆可。 待检蛋白电泳 贴浸有抗血清的滤纸 抗原与对应抗体反应 沉淀 漂洗 染色 某一抗原的存在? 　左图为IgG κ型, 中图为IgG λ型，右为正常 SP G A M κ λ SP G A M κ λ SP G A M κ λ 免疫固定电泳示意图 【IFE方法评价】 （1）周期短: 整个操作过程仅需1.5一2h， （免疫电泳需要过夜孵育） （2）敏感性高：能检测到50一150mg/dl含量的单克隆蛋白。（免疫电泳：1g/dl。） （3）分辨清晰:利用非常短的电泳移动距离分离出单克隆组分。 （4）结果易于分析:通过抗原抗体在凝胶内的沉淀模式直接对照常规电泳模式分析。 【IFE的临床应用】 最常用于血清M蛋白的检测 也可用于尿液本周蛋白的检测与κ、λ分型 脑脊液中寡克隆蛋白的检测与分型 其他体液标本中蛋白异常表达 凝集反应的临床应用 抗原的检测 HCG检测、ABO血型鉴定、微生物的检测等 抗体的检测 交叉配血、测微生物感染后的抗体、自身抗体检测等  沉淀反应的应用 1.主要用于血液、体液中蛋白质的测定。 2.优点：稳定性好，敏感度高，精确度高，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染，适合大批量标本检测。3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳技术由于电渗的缘故已不推荐使用。 4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果不易分析。 5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，