色谱的的分析法 --的的研究生 - 吉林医药学院.ppt

第十六章 药品质量控制中的现代 分析方法与技术 基本要求 毛细管气相色谱分析法 手性药物的液相色谱分析法 核磁共振光谱分析法 气相色谱-质谱联用技术 基本要求 3．毛细管柱的性能评价评价指标：分离效率、表面惰性、热稳定性。评价方法：在一定的色谱条件下，分离各种测试物质，获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表面活性。在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率试验来评价热稳定性。 溶液直接进样 进样口温度应高于柱温30~50；采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样，进样量一般不超过数微升，色谱柱越细，进样量应越少，毛细管气相色谱法中，一般应分流以免过载。 顶空进样 适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。供试液在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在非气态和气态达到平衡后，由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中。 （三）应用示例----人尿中劳拉西泮的检测1.测定意义：劳拉西泮(简称LRZ)上用为催眠、镇静和抗癫痫药物 ,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉抢劫等麻醉后犯罪。为了确证这类案件的性质 ,经常需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物进行检测。人体摄入该药后其血液中药物浓度较低 ,且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低 ,对其检测较为困难。该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液排泄。  2.色谱条件：HP-5毛细管柱(30ｍ×0.32mm ,膜厚0.1μｍ)。氮磷检测器,不分流进样(阀关闭时间0.75min),进样口温度:280℃,柱温:200℃(1min)20℃/min280℃ (15min),载气为高纯氮(2.2ｍml/min),尾吹气为高纯氮(10ml/min)。 4.方法学评价（1)选择性: 空白尿1ml及空白尿1ml加LRZ和HEF标准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明尿中杂质不干扰检测.（2)线性试验: 用空白尿配制不同浓度的LRZ标准液进行酶解、萃取、进样分析,将LRZ与HEF色谱峰面积的比值与LRZ在尿液中的质量浓度进行线性回归,得到工作曲线方程 :Y=3.1×10-3X –3.0×10 -3 ,ｒ =0.998。LRZ在尿中的浓度为50～500μg/L范围内呈良好的线性. 建立和发展快速而灵敏的分离和测定对映体药物方法的重要性和必要性 ①对某些手性药物进行对映体的纯度检查； ②生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系； ③评价单个对映体的效价、毒性、不良反应以及药动学性质； ④必要时，可进行手性药物对映体的制备分离。 2．手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添加剂法）：将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与样品形成手性络合物。常用的手性添加剂：配基交换型手性添加剂、环糊精类添加剂、手性离子对络合剂 示例一、左旋吡喹酮中吡喹胺的检查（柱前手性衍生化法）手性衍生化试剂：乙酰葡萄糖异硫氰酸酯色谱条件：色谱柱 NOVA-Pack C18（150mm×3.9mm） 流动相 甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾 （pH2.8）（51∶49） 该法所用的手性衍生化试剂可以与一级胺、二级胺在温和的条件下迅速反应，所生成的非对映体衍生物可以在普通色谱系统中进行分离分析。 2．胶束电动毛细管色谱（micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC）或MEKC） 在缓冲液中加入离子型表面活性剂，形成胶束。被分离物质在水和胶束两相分配，各溶质在因分配系数存在差别而被分离。 3. 毛细管凝胶电泳（capollary gel electrophoresis, CGE）毛细管中装入单体和引发剂引发聚合反应生成凝胶作支持物进行的电泳。 4. 毛细管等速电泳（capillary isotachor-phoresis, CITP）采用前导电解质和尾随电解质，在毛细管中充入前导电解质后，进样，电极槽中换用尾随电解质进行电泳分析，带不同电荷的组分迁移至各个狭窄的区带，然后依次通过检测器。 5. 毛细管电色谱（capillary electrochromatography, CEC）将细粒径固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂覆固定相以电渗流驱动操作缓冲液进行分离。 6. 毛细管等电聚焦电泳（capillary isoelectric focusing, CIEF）将毛细管内壁涂覆聚合物减少电渗流，再将供试