9第四章微生物的营养和培养基技术分析.pptVIP

思考题：请设计一个完整的实验方案，如何获得一株可利用苯作为碳源和能源的微生物。 作业：1.有一培养基如下：甘露醇，MgSO4，K2HPO4，KH2PO4，CuSO4，NaCl，CaCO3，蒸馏水。试述该培养基的碳素来源、氮素来源和矿质来源；该培养基可用于培养哪类微生物？ 2.试设计一个分离纤维素分解菌的培养基，并说明各营养物质的主要功能（只写明成分，不要求定量）。 1.制备两种平板培养基：一种以苯为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B） 2.从含苯量高的环境采集样品； 3.适当稀释样品，涂布平板A，适当恒温培养，观察是否有菌落产生。 4.将平板A上的菌落编号，并转移至平板B，恒温培养（在平板B上能生长的是自养型微生物） 5.挑取在平板A上生长而在平板B上不生长的菌落 * 第四节 培养基(medium) 定义：应科研或生产的需要，由人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质（混合养料）。 特点：任何培养基都应具备微生物所需要的六大营养要素，且应比例适当。而且一旦配成必须立即灭菌。 用途：促使微生物生长；积累代谢产物；分离微生物菌种；鉴定微生物种类；微生物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品 一、培养基的配制原则 （一）培养基组分应适合微生物的营养特点（目的明确） （二）营养物的浓度与比例应恰当（营养协调） （三）物理化学条件适宜（条件适宜） （四）根据培养目的选择原料及其来源（经济节约） （一）培养基组分应适合微生物的营养特点 即根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。 不同营养类型的微生物，其对营养物的需求差异很大。如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养型微生物的培养基至少需要含有一种有机物质，但有机物的种类需适应所培养菌的特点。 按微生物的主要类群来说，它们所需要的培养基成分也不同： 细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基 LB (Luria-Bertani)培养基 放线菌： 高氏一号培养基 真菌： 查氏合成培养基 PDA (Potato-Dextrose-Agar)培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 酵母菌： 麦芽汁 当对试验菌营养需求特点不清楚的时候，可以采用‘生长谱’法进行测定。 培养目的不同,原料的选择和配比不同. 实验室一般培养:普通常用培养基; 遗传研究:成分清楚的合成培养基; 生理、代谢研究:选用相应的培养基。 例如枯草芽孢杆菌: 一般培养:肉汤培养基或LB培养基; 自然转化:基础培养基; 观察芽孢:生孢子培养基; 产蛋白酶:以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶 培养基. （二）营养物的浓度与比例应恰当 浓度过高——微生物的生长起抑制作用， 浓度过小——不能满足微生物生长的需要。 碳氮比（C/N）直接影响微生物生长与繁殖及代谢物的形成与积累，故常作为考察培养基组成时的一个重要指标； 速效性氮（或碳）源与迟效性氮（或碳）源的比例 各种金属离子间的比例 碳源中的碳原子的mol数 氮源中所含的氮原子的mol数 C/N比值= 例：谷氨酸生产中 C/N ＝4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； C/N＝3/1 时，菌体生长受抑制，而谷氨酸大量增加。 （三）物理化学条件适宜 （1）pH: 各类微生物的最适生长pH值各不相同： 细 菌：7.0~8.0 放线菌：7.5~8.5 酵母菌：3.8~6.0 霉 菌：4.0~5.8 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，培养基的初始pH值会发生改变，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式： 内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培养基的碳氮比。 外源调节：按实际需要不断向发酵液流加酸或碱液 磷酸缓冲液：pH值从6.0~7.6之间 K2HPO4+HCl KH2PO4+KCl KH2PO4+KOH K2HPO4+H2O 加入CaCO3： CO32 – HCO3 – H2CO3 CO2+H2O +H+ –H– +H+ –H– 培养基中所含氨基酸、肽、蛋白质等物质也可起到缓冲作用。 （2）渗透压和aw 渗透压 等渗溶液 适宜微生物生长