兽医微生物综合实习实验报告作大全业.docVIP

华南农业大学实验报告 实验项目名称：《兽医微生物》综合实习 所属课程名称：《兽医微生物学》 学生姓名123 学号：20098765489 专业年级：09班 成绩： 实验目的 (1).巴氏杆菌的培养鉴别与病毒的培养 1．掌握营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂、三糖铁层琼脂的配置方法。 2．细菌的分离培养技术（解剖、病料的采集，从组织中分离细菌、培养细菌、移植细菌、纯化细菌，细菌接种）。 3．细菌的鉴定技术（光学显微镜油镜的技术，组织涂片，在组织材料中认识细菌、辨别细菌、生化实验、血清学实验技术及细菌片的涂片、染色、镜检等技术）。 4．病毒的鸡胚分离培养技术（鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种、胚液的收集）病毒的血凝试验和血凝抑制试验。 5．掌握实验用具的包扎、消毒等。 (2).酶联免疫吸附实验检测小猪FMDV抗体水平 1.掌握给猪只注射药物和疫苗的方法，掌握从前腔静脉抽取猪血（用于分离血清）。 2.掌握血清的分离技术。 3.掌握病毒的培养，手集，纯化，浓缩等。 4.掌握ELISA反映条件的优化，熟悉掌握酶联免疫吸附实验的原理，具体操作和应用。 二、实验原理以及实验要求 （1） 1.利用细菌的一般生理生化特性进行鉴别。 2.酶联免疫吸附试验为一种固相酶免疫测定技术，先将已知抗原或抗体包被于固相载体的表面，与待检样品中的相应抗体或抗原发生反应，再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合，最后加入酶的作用底物，根据产物颜色的深浅或测定其A值，可进行定性或定量分析。 (2) 装有不明病毒的80编号小管一支、9-10日龄鸡胚、打孔器、一次性注射器、剪刀、记号笔、镊子、灭菌乳钵、离心管、空平皿、玻璃沙、空试管几支、西林瓶、青霉素、移液管、锥型瓶、U型96孔微量反应板、蛋架 (3)载玻片、接种环、镊子、盖玻片、显微镜 （4）实验设备：高压消毒炉、恒温培养箱、离心机、电子天平、冰箱、轻微振荡器 2.ELISA实验检测小猪FMDV的抗体水平 （1）一次性注射器、不锈钢注射器，口蹄疫疫苗，酒精和棉球。 （2）离心管，离心机，微量注射器。 （3）FMDV，BHK-21细胞（貂鼠肾细胞），温箱，水浴锅，透析袋，PEG20000.生理盐水。 （4）酶联检测仪，酶标版，病毒，洗涤液，封闭液，待检测血清，阴性血清，阳性血清，酶标二抗，底物液，终止液。 五、实验方法和步骤 （一）细菌的的分离及诊断 1．实验前准备（此步分量为一组6个人） （1）小鼠的攻毒：挑选健康的小鼠，术者在做好接种准备之后，先用右手抓住鼠尾，令其前爪抓住饲料罐的铁丝网，然后用左手的拇指和食指捏紧头颈部皮肤，并反转左后使小鼠腹部朝上，将其尾巴夹在左手掌与小指之间，右手消毒小鼠大腿根部，把持注射器，以针头插入大腿，注入约0.2.攻毒后，每天观察一次，将病死的小鼠放入冰箱冷藏以备实验。 （2）心脏采血：兔心脏采血：触摸健康兔左前肢以下、胸骨以上、靠左的位置，通过心跳感觉心脏位置，用碘酒、酒精棉球消毒，用无菌注射器抽取1ml抗凝剂，并润湿注射器，待酒精干后，将针插入，边插边回抽，当有血冲上针筒时，即抽取血9ml，用作血平板。 鸡心脏采血：将无菌注射器抽取1mL抗凝剂，并湿润注射器。触摸健康鸡左翼以下、胸骨以上、嗉囊靠左的位置，通过心跳感觉心脏位置，用碘酒、酒精棉球消毒，待酒精干后，将针插入，边插边回抽，当有血冲上针筒时，即抽取血7ml，用作血平板。 (3）①血细胞凝集试验（HA）（单位：ūl） 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释 度 1：2 1：4 1：8 1：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：512 1：1024 1：2048 对照 生理 盐水 病毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 鸡红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡1~2min， 放入37℃箱中15~30min.判断1个单位血凝价,并配成4个单位病毒溶液. 血细胞凝集抑制试验（HI）（单位：ūl） 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12