不同剂量甜菜碱对小鼠腹腔酸性磷酸酶活性的影响解析.docVIP

不同剂量甜菜碱对小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶的影响 摘要 甜菜碱不仅可以同时降低血清乳酸脱氢酶、醛缩酶活力，抑制荷瘤小鼠的糖代谢过程来达到抗肿瘤的目的，也可以通过剂量性地降低血清总胆固醇、三酰甘油来降低血脂。通过查阅大量文献资料，现已判定甜菜碱对于提高机体免疫力有提升的作用。为此，本次实验通过每天对昆明小鼠喂以不同剂量的甜菜碱来探究其对昆明小鼠腹腔内巨噬细胞中酸性磷酸酶活性的影响来间接揭示其在免疫作用方面的影响。 1 材料和方法 1.1动物 昆明小鼠，体重（20±2g）全部雄性，出生4周龄。 1.2主要器材和试剂 1.2.1器材：眼科剪、眼科镊、10ml一次性注射器、10-1000ml移液枪、报纸、玻片架。 1.2.2试剂：不同梯度浓度甜菜碱、6%淀粉肉汤、生理盐水、75%酒精溶液、3%β甘油磷酸钠、10%中性福尔马林、酸性磷酸酶作用液、1%硫化铵溶液。 1.2.3试剂配方： 醋酸缓冲液：贮备液A：0.2mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀释至1000ml）。 贮备液B：0.2mol/L醋酸钠（无水醋酸钠16.4g配成1000ml）。 PH4.6：25.5mlA+24.5mlB稀释成100ml。 10%中性福尔马林（PH6.8-7.1）：甲醛10ml+蒸馏水90ml+醋酸钠2g 酸性磷酸酶作用液:蒸馏水90ml+0.2mol/L醋酸钠缓冲液（PH：4.6）12ml+5%硝酸铅（捕获剂）2ml+3.2%甘油磷酸钠（底物）4ml。 先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓慢混合，变混边搅匀后若PH不够5.0，可加入少量醋酸调整。此作用液最好在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。 1%硫化铵溶液：硫化铵1ml+99ml蒸馏水 6%淀粉肉汤（灭菌）：肉汤3g+6g淀粉+100蒸馏水 1.3小鼠的饲养 实验前二周将40只小鼠随机等分为5组，每组8只，其中阴性对照1组，每天用注射器灌胃0.2ml蒸馏水;实验组3组，每天分别用注射器灌胃100mg/ml、g/ml、200g/ml的甜菜碱0.2ml;阳性对照1组，每天用注射器灌胃0.2ml叶酸。所有小鼠均在同一时间进行灌胃。 1.4腹腔灌洗液的提取 参考文献并加以改进。实验前3天每天向消毒的小鼠腹中线左右0.5cm内的腹腔中注射已灭菌的6%淀粉肉汤1ml。实验当天将小鼠在报纸上脱颈处死，用75%酒精溶液浸泡3min，后用注射针头将小鼠的四肢固定在无菌板上。用眼科剪先将腹中线左侧或者右侧鼠毛的剪掉，裸露出皮后剪一小开口，后用酒精擦拭的移液枪缓慢地注入（30s）1ml生理盐水，小心地轻柔小鼠腹部30s后再缓慢地回抽。 2 实验步骤 2.1 酸性磷酸酶活力的测定 2.1.1取细胞悬液在预冷的载波片上1-2滴，将玻片迅速放到冰箱内（4°C），让细胞自行铺展30min。后将玻片转入10%中性福尔马林，冰箱内4°C固定30min。自来水漂洗5min，把水甩干。滴加酸性磷酸酶作用液中，37°C处理30min。自来水漂洗片刻后，1%硫化铵处理5min。自来水冲洗，甩干。用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。 2.1.2镜检时取多处不同的视野拍出照片，后做灰度对比。 3 实验结果 3.1 灰度测量结果 表 组 观测数 剂量 单位像素下的灰度值 水 6.000 0.000g/ml 213.055±0.448 甜菜碱 6.000 0.100g/ml 223.610±4.433 6.000 0.150g/ml 235.504±2.473 6.000 0.200g/ml 210.998±5.828 与阴性对照组相比**P〈0.01 表1所示用剂量为0.100g/ml以及0.150g/ml浓度的甜菜碱处理过的小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶的灰度值较阴性对照组呈极显著性差异。 3.2 灰度趋势图 图1不同剂量甜菜碱下小鼠腹腔中巨噬细胞酸性磷酸酶的灰度趋势图 图1所示所测小鼠腹腔中巨噬细胞酸性磷酸酶灰度值先随甜菜碱的剂量增加而增加，后随其剂量的增加而降低。 3.3 含阳性对照组的柱形图结果 图2不同剂量甜菜碱及一定剂量叶酸下小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶灰度柱形图 图2所示一定剂量下的甜菜碱的确与阳性对照组一样起到了相同的作用。 4 讨论 本次实验通过表1可初步确定甜菜碱对小鼠腹腔中巨噬细胞的酸性磷酸酶活性产生了极显著的影响，但是0.100g/ml、0.150g/ml和0.200g/ml剂量的甜菜碱其标准差较阴性对照组波动较大，相对不稳定。 图1所示随着甜菜碱剂量从0增至其最适浓度，灰度的值也随