细胞生物学详解.docVIP

细胞生命的进化 一．细胞生命的起源：导致细胞生命形成的关键因素是地球的形成及地球大气层条件的变化。一般将细胞生命的起源分为5个阶段：①地球和原始大气层的形成；②有机分子的自发形成；③分子聚合体的形成；④生命初级聚合体的形成；⑤原始细胞的形成。 ②有机分子的自然形成：地球上形成有机分子，是细胞生命起源的先决条件。地球上最早的细胞出现在35亿年前。 ③分子聚合体的形成：从分子到原始细胞的生命进化中，两个主要事件是遗传信息的形成和细胞膜的形成。遗传信息的形成是生命进化的转折点。核酶的发现，说明RNA在生命起源中起了主导作用，它比DNA和蛋白质的起源都早。脂双层结构的自动装配，为细胞质膜的形成提供了可能。 ④生命初级聚合体的形成：此阶段包括：1.如何利能源驱动化学反应途径的的进行；2.酶分子的形成以及酶催化反应途径的形成；3.指导合成和再生的信息系统的形成。生命初级聚合体包括生物大分子的形成（酶和ATP）、代谢的生物途径的形成、能量转化、信息的形成。生命初级聚合体一旦形成，生命的雏形已形成。 真核细胞的起源：真核细胞由原核细胞进化而来，进化的主要事件是呼吸代谢的发展和内膜系统的形成。线粒体和叶绿体为内共生起源，内膜系统则是通过质膜内陷形成。首先形成内质网和核膜，然后形成高尔基体、溶酶体、内体。 细胞生物学研究方法 光学和电子显微镜成像原理 光学显微镜和电子显微镜有两个共同点：焦距和角孔径。焦距是透镜的中心平面到焦点的距离，而孔径角是光从样品进入显微镜的物镜镜口角，因此角孔径实际表示有多少光离开样品通过透镜，最好的光学显微镜的角孔径为700左右。 分辨率：分辨距离越小，分辨率越高。人眼分辨率为100μm；光学显微镜的分辨率为0.2μm。其计算公式为： 其中：n=聚光镜和物镜之间介质的折射率，空气为1,油为1.5 α=孔径角的半角，sinα最大值为1. γ=照明光源的波长 0.61为恒定参数，表示成像的点虽被重叠但仍能被区别的程度。由上式可知，孔径角越大，进入物镜的光越多；介质折射率越大，则数值孔径越大；这些都可提高分辨率。 最大分辨率：用紫外光作光源可使分辨率提高到0.1μm，但紫外线必须通过照相。 分辨极限与放大率：细菌和线粒体是光学显微镜能够清晰可见的最小物体。在光镜下能清楚分辨相邻两点之间的最小间隔为μm。光学显微镜的最大放大率只能是透镜的数值孔径的1000倍，而用油镜时为1400倍。电子显微镜的理论分辨极限为0.1nm-0.2nm，但一般难以达到。 分辨率 光源 透镜 真空 光学显微镜 300nm 可见光 玻璃透镜 不需真空 200nm(油镜) 可见光 玻璃透镜 不需真空 100nm 紫外光 石英透镜 不需真空 电子显微镜 0.1nm 电子束 电磁透镜 真空 常用显微镜 普通双筒显微镜：物镜转化器上方装有4个棱镜，使经过物镜的光线平分为两路到达目镜，故双筒显微镜的亮度比单筒者暗。双筒显微镜的优点为同时用两眼观察，由较强的立体感。 荧光显微镜：以紫外线为光源，使之发出荧光。可用于研究细胞内物质的吸收、运输以及化学物质的分布及定位等。最后成像的为可见荧光，紫外光已被吸收滤片滤去。 相差显微镜：能观察无色、透明、活细胞中的结构。它是利用光的衍射和干涉特性使相位差变成振幅差，表现为明与暗的对比。 暗视野显微镜：由于光的反射和衍射，使颗粒似乎增大体积而可辨别。但当光线很强时或有衍射存在的情况下则看不出尘埃的颗粒。故可在暗视野下观察细微粒子。暗视野显微镜主要观察物体轮廓，分辨不清内部细微构造，适合于观察活细胞内的细胞核、线粒体、液体介质中的细菌和霉菌。 倒置显微镜：结构组成与普通显微镜一样，只不过物镜和照明系统的位置颠倒过来。 光学显微镜的样品制备 样品初固定：目的是杀死细胞，稳定细胞的化学成分，并且使样品硬化以便处理和切片时不受破坏。一般用浸泡与固定液（甲醛或戊二醛）中，使蛋白质的游离氨基酸形成共价键，将临近蛋白质牢固交联在一起。 包埋和切片：首先用液态石蜡或树脂做包埋剂，使之渗入组织，硬化成包埋块。适用于光学显微镜的切片厚度为1-10μm。 染色：苏木精对负电荷由亲和性，能显示核酸分布；酸性染料伊红可使细胞质染色。 电子显微镜 电子束的波长比光的波长短100000倍，因而可大大提高分辨率。 电子显微镜可分为：透射电子显微镜和扫描电子显微镜。 (透射电子显微镜(TEM)是让电子束穿过样品而成像。电子显微镜基本结构由3部分组成：电子光学系统（镜筒）、真空系统、电子学系统（供电系统）。电子显微镜必须在高度真空条件下进行工作。电子学系统需要高压稳压。 (扫描电子显微镜(SEM)：使用与透射电子显微镜完全不同的成像方式，即用电视的方式成像。主要