普通生物学实验讲义解析.docVIP

普通生物学实验（动物、植物） 实验一（1） 普通光学显微镜及其使用 一、实 验 目 的 了解普通光学显微镜的构造及其原理，并熟练掌握其操作方法。 二、实 验 用 品 普通复式光学显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、擦镜纸。 三、实验原理和方法 普通光学显微镜从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 1、显微镜的光学系统 光学系统通常由物镜、目镜、聚光器和光阑组成。 1)、物镜(objective) 显微镜的质量主要取决于物镜。物镜种类繁多，性能相差悬殊。物镜的放大倍数用数字表示，如4、10、20、40和100等。 a．干燥系(drysystem)物镜 镜检时，物镜与盖片间，不添加任何液体。如4×、10×、20×和40×物镜都属干燥系，使用时不加用任何浸液，只以空气为介质，其折射率为1，所以干燥系物镜的数值孔径小，分辨率亦低。 b．浸没系(immersionsystem)物镜 物镜在使用时，前透镜与盖片之间浸满液体。依充添的浸液的不同，主要可分为油浸系(oil immersion)和水浸系(water immersion)等类别。最常用的浸没液为香柏油(cederoil)，其折射率为1.515，与玻片的折射率相近，且不易干涸。使用水浸物镜时加用水，其折射率1.33。 油浸物镜外壳上刻有：“oil”、“oel”、“imm”和“HI”等字样，水浸物镜刻有“W”或“Water”字样；油、水浸两用物镜则刻上“oil+w”字样；甘油浸没物镜刻有“Glyc”或“Glyz”等字样。 2)、目镜(eyepiece，ocular) 目镜作为影像和肉眼间的放大镜，将物镜映来的影像做第二次放大。同时，目镜作为物镜的补偿，把物镜残留下的像差给予进一步校正，以提高造像质量。目镜作为投影器，把放大的影像投射在摄影暗箱的焦平面上。 目镜通常由两片(组)正透镜组成，上面的透镜叫接目或眼透镜(eye—lens)，它决定倍数和成像的优劣；下面的透镜叫会聚透镜(collectivelens)或场镜(fieldpiece)，它使视野边缘的成像光线向内折射，进入眼透镜中，使物体的影像均匀明亮。上下透镜的中点，或场镜下面设有用金属制造的光阑叫做视野光阑或场光阑(field stop)。场镜或物镜在这个光阑面造像，在光阑上可装入各种目镜测微计、十字线玻片和指针等。由眼透镜射出的成像光线基本上为平行光束，并在目镜之上约10mm处交叉，此交叉点称作出射光瞳。 3）聚光器(condensers) 聚光器等聚光系统，使来自光源的光线放大，并聚成光束，透过载片照明样品，射入物镜。聚光器由聚光镜和孔径光阑(aperture diaphragm)构成。聚光镜属正透镜系统，由一至数片透镜组成，具会聚作用，把照明光线会聚放大，射向被检样品，进入物镜。孔径光阑位于聚光镜下方，光阑的孔径可变，以改变照明光束的直径，调节进光量。孔径光阑的开度，即聚光器数值孔径，左右显微镜的成像质量。物镜的有效数值孔径，其中涵容聚光器的数值孔径，即: 物镜的有效数值孔径＝物镜数值孔径＋聚光器数值孔径/。 2、显微镜的照明 普通光学显微镜，普遍采用中心亮视野透射照明法。 照明光源：照明光源以钨丝灯和卤钨灯为多。卤钨灯优于钨丝灯，为显微镜的主要光源。 3、光路及成像 显微镜的光路或光程(1ight path)即光源照明的通路。光路始于光源灯，光源装在镜座后方的灯室(1amp housing)内。光源灯丝(S)发出的色光，由聚光透镜集光成束或光锥，经镜座中的视场光阑(L)，投向反光镜，呈现45°折射向上，入射孔径光阑，光源灯丝在此平面处第一次成像(S1)。透过聚光镜使光线放大、聚集，透射、照明载物台的样品，视场光阑在此平面处第一次成像(L1)，即在样品聚焦的同时，可见清晰的、缩小的视场光阑的影像。成像光束继而进入物镜，在物镜的后焦面(rearfocal plane)的平面处，光源灯丝第二次成像(S2)。成像光束经转折进入目镜，在目镜的场光阑平面处，视场光阑第二次成像(L2)。最终，成像光束从目镜眼透镜射出，在目镜的出射光瞳处，光源灯丝第三次成像(S3)。视场光阑的第三次成像(L3)在人眼的视网膜上。在成像系统中，一个位置的改变，会引起整个成像关系的改变，光源灯前后位置的稍许位移将导致光源成像位置的变动。4、放大率(magnification) 显微镜最后形成的物体放大影像，对被检物体的大小比例称为放大率，即像高比物高。放大倍数以长度计算，而不是以面积或体积计算。 某些显微镜为适应不同需要，镜筒内装有倍数不同的附加透镜系统。在专用的显微摄影装置中，附有摄影透镜(photographic lens)。显微摄影总放大率的计算，除目镜、物镜的放大率外，摄影透镜的放大率亦要计算在内。 显微镜的总放大率(Mt)应为；