MHCHLA检测及应用.ppt

抗体1μl 1μl 淋巴细胞悬液 5 μl 补体(兔血清) 3 μl 伊红或荧光染料 8 μl 福马林 CDC工作记录 血清编号 特异性 结果 血清编号 特异性 结果 NS - 1 287 A10 1 057 A1 1 007 A11 8 243 A2 8 735 A11 8 476 A2 8 125 A11/A33 8 T92 A2/B7 8 O35 A31 4 134 A9 4 376 A31/A30 2 231 A24 1 230 A33 1 E54 A24 2 243 A33 1 4T6 A24 1 ALS + 8 (4)CDC的技术要点 HLA抗体为同种抗体, 来自产妇或自愿免疫者, 检测Ⅱ类抗原需除去其中的Ⅰ类抗体, 现也可用单克隆抗体 检测Ⅰ类抗原用PBL或T细胞,检测Ⅱ类抗原需用B细胞，细胞的活率要高，应避免过多的红细胞或血小板的污染 检测Ⅱ类抗原时孵育时间延长 (5)CDC试验的用途 HLA定型：用已知抗体 HLA抗体筛选，鉴定：用已知抗原 交叉配合 群体反应性抗体检测：用多个已知HLA型的细胞，检测受者血清能和多少个细胞反应，即抗体种类的多少 2.混合淋巴细胞培养(MLC) (1)原理: 两个体淋巴细胞在一起培养,如HLA不合,将引起增殖反应 淋巴细胞出现母细胞化 或摄入的标记的核苷增加，致CPM增高 1,2 3,4 刺激者 1,2 3,4 应答者 3,4 1,2 CPM CPM (2)双相MLC (3)单相MLC: 淋巴细胞经丝裂霉素或X射线处理失去增殖能力, 在MLC中, 仅能作为刺激者, 另一个体细胞成为应答者, 如已知刺激细胞的HLA-D抗原, 且是纯合子 (HTC) , 即可分型应答细胞 ? 1 m 1细胞 能否使 ?细胞增殖,决定于它们的HLA-D抗原是否一致 CPM 不增, ?细胞有1抗原 CPM 增高, ?细胞没有1抗原 PLT分型 3,2 3,4 3,4 2 预致敏淋巴细胞(PL) m 一单倍型相同的两个体淋巴细胞进行MLC, 则应答细胞增殖并保留免疫记忆 以PL为应答细胞, 待测细胞为刺激细胞进行MLC, 如待测细胞表达PL记忆的抗原, 则PL将迅速增殖 ? 3,4 2 m CPM 增高 有2抗原 CPM 不增高 没有2抗原 类型 刺激者 应答者 已知 时间 检测 阴性 HTC 待测 HTC 6天 D,DP 阳性 待测 PL PL 2天 DP 阴性分型法为初次免疫应答 阳性分型法为再次免疫应答 3.分子生物学分型法 PCR-SSP:顺序特异性引物PCR PCR-SSO:顺序特异性寡核苷酸杂交PCR PCR-SSCP:单链构象特异性PCR PCR-RFLP:限制性内切酶片段长度多态性PCR PCR-DNA(SBT):DNA测序 除测序外上述方法均不能检出所有的等位基因,为此,可两种方法结合使用 DR1 DR2