HPLC测定冬白梅片中黄芩苷的含量(最终版)….docVIP

论文题目 HPLC测定冬白梅片 中黄芩苷的含量 学 院 化学化工学院 专 业 制药工程 年 级 2010级 学 号 201024105207 学生姓名 李明新 指导教师 覃 亮 完成时间 2014 年 3 月 肇庆学院教务处制 HPLC测定冬白梅片中黄芩苷的含量 李明新 指导教师：覃 亮 摘 要 目的：通过实验，建立一种稳定可靠的HPLC法测定冬白梅片中黄芩苷的含量。检测方法：HPLC法，以Diamonsil C18 5μm 250×4.6mm 为色谱柱，以甲醇-0.2%磷酸（50:50）为流动相，流速1.000mL/min，柱温35℃，以277nm为检测波长，采用峰面积外标法进行定量分析。检测结果：在此条件下，黄芩苷的含量在0.2515μg～1.5089μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（R2= 0.9999，n=6），平均加样回收率为97.95%，RSD%=0.45%（n=6）。结论：本法操作简便，专属性强，分离效果好，结果准确。 关键词 冬白梅片；黄芩苷；含量测定；HPLC 1引言 1.1 概述黄芩（ScuteLLaria baicaLensis Georgi）是芩草，山茶根、土金茶根为唇形科植物，芩字本义为止血草因俗黄芩。以根入药，味苦、性寒，清热燥湿凉血安胎，解毒。主要河北、陕西、黑龙江、辽宁、内蒙古、山东等地。黄芩抗菌临床应用比黄连还好，不产生抗药性。黄芩提取液农业病害防治黄芩是一种常用的中药。黄芩苷（BaicaLin）是黄酮类化合物黄芩根提取分离的生物活性，有利尿、抑菌、抗变态抗炎及解痉作用，并且具有强的反应生理效能。黄芩苷吸收紫外线清除氧自由基又黑色素一种很好的功能性美容化妆品原料。 图 流动相的选择 图3 制备溶液的选择 3.1.4 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，置100mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释到刻度处，摇匀，精密量取上述溶液10mL置20mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释到刻度处，滤过，取续滤液，即得。 3.1.5 阴性溶液的制备 按冬白梅片的制备工艺及制备过程中的处方比例，配制不含黄芩的阴性对照样品，按“3.1.3”项下方法制成阴性对照溶液。 3.1.6 色谱条件 以甲醇-0.2%磷酸（50:50）为流动相，流速1.000mL/min，柱温35℃，检测波长为277nm，进样量为对照品溶液和供试品溶液各20μL，在此条件下，按黄芩苷计算，理论塔板数应不少于2500，且阴性无干扰[15]。 3.2 方法学考察[16] 3.2.1专属性实验 在“3.1.6”项色谱条件下，分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。验证不含黄芩的阴性对照品溶液无干扰。 3.2.2线性关系考察 精密称定黄芩苷对照品10.97mg，按“3.1.4”项下方法制成浓度为50.2974μg/mL的对照溶液，取上述溶液分别进样5μL、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL，测定色谱峰面积，记录色谱图。 3.2.3精密度试验 取同一浓度的黄芩苷对照品溶液（50.2974μg/mL），按拟定的色谱条件连续进样6次，测定黄芩苷的峰面积并记录色谱图。 3.2.4稳定性试验 稳定性是指在一定的测定条件下，时间对样品溶液测定结果的影响程度。 A 黄芩苷对照品(tR=12.650，n=4916) B 供试品（tR=12.746，n=6920） C 阴性对照（tR=12.650，未检测到峰） 图4 专属性实验结果 4.2 线性关系考察结果 按“3.1.6”项下拟订的色谱条件测定，记录峰面积值，按含量测定的方法测定，数据见表2。 表2 线性考察结果 进样量（μL） 0.2515 0.5030 0.7545 1.0059 1.2574 1.5089 峰面积 1645299 3268055 4905962 6552560 8274921 9855769 以测得的峰面积为纵坐标（Y），对照品的进样量为横坐标（X），得到回归方程： y=6557845.9787x－21788.3638 R2=0.9999 标准曲线图如图5所示： 图5 线性考察结果 该关系考察曲线的相关系数RSD%不得大于3%，RSD%为%，表明本实验的仪器精密度良好 图6 精密度试验结果 表3 精密度试验结果 实验编号 峰面积 RF RF平均值