分子生物学(10个主干实验)步骤.docVIP

《生物学实验四》实验操作步骤 2010年3月 实验一、细菌培养、细胞培养 实验二、昆虫病毒DNA的分离、纯化和鉴定 　1、2 ml病毒感染的培养细胞悬浊液 ↓8000 r/min 4℃ 10min，去上清 2、 加PBS漂洗混匀 ↓ 8000 r/min 4℃ 10min ，去上清 3、加250μl TE 悬浊 ↓ 4、加250μl Lysis　Buffer裂解细胞 ↓ 5、 加20μl Proteinase K（10mg/ml ） ↓50℃ 4h /37 ℃ 过夜 6、加3μl RNase A（10mg/ml ） ↓37℃ 30 min 7、 加等体积酚-氯仿 ↓12000 r/min 4℃/10min 取水相（剪枪头，烤平） 8、重复步骤7 9、水相加1/10体积 3mol/L NaAC（pH4.8） ↓ 10、加2倍体积的无水乙醇沉淀病毒DNA ↓-20℃，过夜 ↓12000 r/min 4℃/5min，去上清 11、70% 乙醇洗涤沉淀 ↓12000 r/min 4℃/5m