细菌视紫红质基因的克隆及鉴定解析.docVIP

武汉东湖学院 生物技术综合实验论文 细菌视紫红质基因的克隆及鉴定 院系：生命科学与化学学院 姓名：*** 专业：**级生物技术 指导老师：金卫华、邓丽娟、涂毅 二〇**年*月 摘 要 本实验室通过将视紫红质目的基因（即bop基因）导入pUC18质粒制备得到重组质粒，再将该重组质粒导入到大肠杆菌DH5α细胞中进行克隆，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定，初步证实该实验实现了视紫红质目的基因（即bop基因）的克隆。 本次实验，通过老师提供的大肠杆菌DH5α（含pUC18质粒）菌种平板和大肠杆菌DH5α（不含pUC18质粒）菌种平板进行接种后对比，在氨苄青霉素选择性培养基的筛选作用下，得到了含pUC18质粒的大肠杆菌DH5α；通过SDS碱裂解法制备得到了pUC18质粒，并通过琼脂糖凝胶电泳鉴定；以实验室老师所提供质粒为模板，进行PCR扩增得到目的基因（带BamHⅠ和HindⅢ 的酶切位点），并通过琼脂糖凝胶电泳鉴定和回收纯化；在限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ 的作用下，得到酶切后的pUC18质粒和目的基因，并通过琼脂糖凝胶电泳鉴定和回收纯化；在T4DNA连接酶的连接作用下，制备出重组质粒；通过氯化钙制备得到感受态大肠杆菌DH5α细胞；在42℃短时间的热冲击处理（热休克）下，重组质粒被感受态大肠杆菌DH5α细胞所摄取，随着大肠杆菌DH5α细胞的增殖而克隆； 为了鉴定重组质粒确实含有视紫红质目的