生物化学综合实验报告解析.docVIP

存车处 生物化学综合实验报告 项目名称：核酸的分离纯化及性质研究 指导教师： 商亚芳 班 级：食品科学与工程类13-04班 姓 名：俞海清 学 号：2013218687 日 期：2015/07/02-07/03 小组成员：俞海清 曾斯棋 核酸的分离纯化及其性质利用Abstract:?In order to extract the plant’s DNA and the pluck’s DNA.we should break cells,then separate the DNP.Use the SDS to break protein and DNA.Phenol – chloroforM – isoaMyl alcohol Mixture can make protein denaturation .place it on the centrifugal machine to remove the protein .Then,take let the DNA dip into ethylalcohol.it can separate the DNA . In order to obtain high purity DNA, use the right amount of RNase to degradate residual RNA, recycled ethanol to extract DNA over and over again.Using?ultraviolet?absorption?characteristics?determine?the?purity?of?DNA .we found that the purity of DNA is high.Diphenylamine is used to check the content of DNA, the discovery of DNA’s content is low. DNA’s yield is very low.Finally, agarose gel electrophores is used to separate DNA and check molecular weight of DNA fragments.Under the uv light,we found standard DNA banding and the banding which belong to pending text sample successfully. 关键词：DNA Key words：DNA separat diphenylamine ethylalcohol agarose gel electrophores Phenol – chloroforM – isoaMyl alcohol Mixture 前言： 核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。核苷酸 聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞 微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。核酸样品质量将直接关系到实验的成败。在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸二酯键，破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液需加核酸酶抑制剂。 原理： 组织中核酸的分离与纯化原理： 2. 肝脏中DNA的提取及纯度鉴定原理：Rnsae去除RNA，再用氯仿使酶蛋白变性沉淀，离心去除，最后用乙醇作沉淀剂，得到更纯的DNA。DNA纯度鉴定需要测定A260，A230和A280的值，经验数据表明，高纯度DNA样品A260/A280的值在1.9左右，当比值高时说明样品中混杂有RNA，当比值低时表明样品中蛋白质没有脱净；而A260/A230应大于或等于2.0，若比值过小则表明有杂质（一般多酚类或色素）。因此，可利用A260/A280和A260/A230比值的大小来鉴定DNA样品的纯度。 3. 二苯胺法测定核酸的含量原理：595nm处有最大的吸收，在每毫升含DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。除DNA外，脱氧木糖，阿拉伯糖也有同样的反应。 DNA HO CH2C — CH2 CHO 蓝色化合物 酸性条件