PCR技术及其应用---资料讲解.ppt

屏幕显示方式 Main　 Run Enter List Edit File Lid 运行已有程序 已有程序菜单 删除已有程序 新建反应程序 编辑已有程序 热盖关闭调节 Enter Enter abcdefghi# jklmnopqr# Name #stuvwxyz#In Use! .,-+/():=# Enter PCR1Control MethodBLOCK Sim-Tube 输入文件名,满8个字符自动生成程序名,不满8个字符时用#终止 BLOCK:屏幕显示样品台温度(样品台温控方式) Sim-Tube:屏幕显示反应液温度(模拟管温控方式) Enter PCR1Segment #1 Hold Cycle END 选择预变性保温 循环内第一步温度和时间 Enter PCR1Hold at 94CHold for 5m0s 预变性温度和时间 Enter PCR1Segment #2Hold Cycle END 3 step PCR 循环参数设置 Step #194.0C Hold 0m30s 循环内步骤数 Step #1Option？ No yes 不需要拓展功能 Step #255.0C Hold 0m40s 循环内第二步温度和时间 Step #2Option？ No yes 不需要拓展功能 Step #372.0C Hold 0m30s 循环内第三步温度和时间 不需要拓展功能 设置循环数 后延伸保温 后延伸温度和时间 Step #3Option？ No yes Total Cycle= 35 Segment #3Hold Cycle END Hold at 72.0CHold for 10m0s Segment #4Hold Cycle END 选择反应完后保温 Hold at 4.0CHold for 99m0s 设置反应完后的保温温度和时间 Segment #5Hold Cycle END 终止参数设置 Enter PCR1Estimated Run Time：1h53m05sSave？ YES no 预计反应时间，程序是否保存 Lid LIDTurn off heatedLid below 9C 当温度低于9度时，热盖自动关闭 Run PCR1 PCR2 RUN PCR1Use heated lid? Yes No RUN PCR1Vessel: 0.2TUBE0.5tube plate RUN PCR1Volume(Ul) 50 K RUN PCR1Lid temperature: 19℃ 4.反应完成后,将反应液与凝胶电泳缓冲液按比例混匀,上样电泳。 三、操作步骤 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 生物化学实验技术 目 录 PCR的反应原理 PCR的类型和应用 PCR示例 多聚酶链式反应 （PCR：Polymerase Chain Reaction) Kary B. Mullis PCR是由美国科学家穆利斯提出的一种 体外简化条件下模拟DNA体内复制的DNA 快速扩增的方法，此技术获得1993年诺贝 尔化学奖。 体内DNA的复制体系 DNA聚合酶（I II III） 拓扑异构酶 解旋酶类 SSB 引物 dNTP Mg2+ 5’ 3’ Mullis的PCR构思 引物 引物 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定DNA片段 Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 酶活性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90