HPLC及其在中药分析中的应用资料讲解.ppt

* * 对仪器的一般要求(2005版) 5 紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测物的质量在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。 不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。 * * 对仪器的一般要求(2005版) 5 （3）流动相 由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于5％，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。 * * 梯度洗脱 按设定的时间程序改变流动相系统溶剂组成的比例的洗脱方法. 例: “以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱”(人参) * * 梯度洗脱 以有机溶剂相作为流动相A，以水相（含酸、盐等）为流动相B； 使用混合流动相的，以含有机相比例较高的为流动相A，含水比例高的为流动相B。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。 ? 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种，必须用特定适用牌号的填充剂方能满足分离要求者，可在该品种项下注明。 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 ? 色谱系统的适用性试验通常包括分离度、理论板数、重复性和拖尾因子等四个指标。其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更具实用意义的参数。 按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。如达不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整。 系统适用性试验 色谱柱的理论板数(n) 分离度（R）无论是定性鉴别还是定量分 析均要求待测峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。 重复性 拖尾因子 * * 测定法 （1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量 （2）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 （3）加校正因子的主成分自身对照法 （4）不加校正因子的主成分自身对照法 （5）面积归一化法 * * 常规分析中应注意的问题 1 色谱柱与流动相 以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2～8的流动相。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。 * * 常规分析中应注意的问题 2 紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测物的质量在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。 3 不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。 * * 4 检验中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种，必须用特定适用牌号的填充剂方能满足分离要求者，可在该品种项下注明。 常规分析中应注意的问题 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以