高精度定量毛细管电泳及其高精度定量胶束电动毛细管色谱研析.pdfVIP

高精度定量毛细管电泳及高精度定量胶束电动毛细管色谱研究 摘 要 毛细管电泳由20 世纪80 年代发展至今，由于其具有很高的分离效 能，溶液和样品消耗极少，仪器相对简单等优点，已经越来越广泛地应 用于生物技术、药物研发、医疗诊断、环境保护等各个领域。然而，这 一技术还存在一定的局限性，特别是在其进样方式方面，严重限制了它 在定量分析等方面的发展。本论文主要是对高精度定量毛细管电泳系统 和高精度定量胶束电动毛细管色谱系统进行研究，研制了高精度定量毛 细管电泳系统，确定了最佳的硬件条件，并首次利用这一系统分析实际 样品，得到了理想的结果。另外，首次构建了高精度定量胶束电动毛细 管色谱系统，使得定量系统应用更为广泛有效，同时进行了方法学考察 和实际样品的分析。使这两种电动分析技术的准确度和精密度得到极大 的提高，从而为其进入质控和质保领域奠定了基础。 全文由四章组成。主要内容包括： 第一章介绍了选题背景和意义。主要介绍了毛细管电泳和胶束电动 毛细管色谱。综述了两者的发展以及在实际应用中的重要地位。回顾了 毛细管电泳进样技术的发展，概述了采用阀进样的毛细管电泳技术的历 史和现状，归纳总结了常规毛细管电泳进样技术存在的问题。 第二章的工作主要是建立高精度定量毛细管电泳系统并且将其优 化。定量毛细管电泳系统的搭建：将20 nL 的四通进样阀引入毛细管电 泳系统，考察了进样阀在电场中的最佳位置，得出使系统稳定运行的组 建方式，并将自制的电隔离槽引入定量系统，使进样阀隔离在电场之外； 定量毛细管电泳系统的优化：分析各段毛细管的长度对柱效的影响，并 且考虑空间设置，得到了最佳的毛细管长度。 第三章的内容主要是对于定量毛细管电泳系统的性能测定以及与 传统进样方法的比较，并将其应用到测定实际样品中的咖啡因、可可碱 和茶碱的研究中。定量毛细管电泳系统的性能测定：以苯甲酸和DMSO 的迁移时间和峰面积的 RSD 值作为指标，考察了定量阀进样、电迁移 进样和重力进样的定量精度，用定量毛细管电泳系统分析测得的DMSO 峰面积的RSD 值为1.46%，明显优于两种传统进样方法，其中，重力进 样法测得DMSO 峰面积的RSD 值为2.55% ，而用电迁移进样则为1.76%。 并且利用这一系统连续进样，在不切断电场的条件下，得到更好的定量 精度，DMSO 迁移时间的RSD 值为0.67% ，其峰面积的RSD 值为1.26%。 咖啡因、茶碱、可可碱三种生物碱的色谱条件的建立：通过对缓冲液种 类、缓冲液浓度、缓冲液pH 值以及电泳电压的考察，最终确定的色谱 条件为：15 mM, pH 9.2 的硼砂缓冲液作为背景缓冲液，工作电压为20 kV 。在此条件下三种生物碱分离效果最佳，在此基础上，对于茶叶、咖 啡、可乐等实际样品中的三种生物碱进行检测，得到理想的效果。 第四章的工作中，首次建立了高精度定量胶束电动毛细管色谱系 统，对其性能进行了测定并与传统进样方法进行了比较，然后利用该系 统对头孢他啶、头孢呋辛钠、头孢拉定和头孢曲松钠进行分析检测。定 量胶束电动毛细管色谱系统的性能测定：考察了电渗流以及胶束浓度对 柱效的影响，并以苯甲酸、苯、甲苯和 DMSO 的迁移时间和峰面积的 RSD 值作为指标，考察了定量阀进样、电迁移进样和重力进样的定量精 度，得到定量阀进样定量精度远远优于传统进样方法，以DMSO 为例， 用定量进样法进行进样分析，其峰面积的RSD 为1.89%，低于用重力进 样得到的 5.48% 以及用电迁移进样得到的2.32% 。头孢类药物的色谱条 件的建立：通过对缓冲液种类、SDS 浓度、缓冲液浓度、缓冲液pH 值 以及电泳电压的考察，最终确定的色谱条件为：10 mM 的硼砂、20 mMSDS （pH8.5 ）作为背景缓冲液，工作电压为18 kV。在此条件下四 种头孢类药物分离效果最佳，在此基础上，对四种头孢类药物的注射制 剂进行检测。 本文在传统的毛细管电泳设备的基础上，引入了纳升级的微量进样 阀和自制的电隔离槽，使进样阀被有效的隔离于电场之外。建立了定量 毛细管电泳系统，将其优化并运用于实际样品的定量分析。首次建立了 定量胶束电动毛细管色谱系统，并且对此系统的性能进行优化和评估， 以实际样品的分析证实其优越性。该系统满足了定量分析对仪器精度的 要求，大大拓展了毛细管