DNA序列测定重点详解.pptVIP

DNA序列测定 第一节 概 述 一、DNA序列测定 三、核酸序列分析的目的意义和策略（具体方法） 四、测序的常用方法 （五）用于测序的变性凝胶电泳 胶长40cm，厚度均匀 4~8%丙烯酰胺 7mol/L尿素 四、大片段DNA的测序方法 （一）随机法 超声波处理：将DNA随机断裂成一组相互重叠的300~900bp片段，电泳回收300~600bp片断作亚克隆 DNaseI切割：将DNA随机切割成一组相互重叠的片段，作亚克隆 限制酶消化：限制酶将DNA切割为含粘端的DNA片段，作亚克隆将上述含不同子片段的亚克隆扩增后进行测序 （二）嵌套缺失法 一、化学裂解法测序的原理 1、用放射性核素标记待测DNA一侧末端 2、将标记DNA分为G、A+G、C+T、C 4个反应体系 3、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物 4、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列 三、化学裂解法的特点 不需酶催化 5 ′和3 ′端均可标记，可从两方向测同一DNA 操作繁琐、费时、分辨率较低 第三节 DNA测序自动化和大规模测序 特点 原理同末端终止法 标记物为