基因工程1.1预习解读.ppt

两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶的缝合作用 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 （1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 （2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 （3）在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？ 可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的） 小试身手 DNA1 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA2 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重组DNA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 由于切割后的载体和目的基因具有相同的末端，故重组DNA存在3中可能连接。即 、 、 。 重组DNA一定是载体-目的基因连接吗？ 载体-目的基因 载体-载体 目的基因-目的基因 载体的作用 载体的必要条件 载体的种类 阅读课本第6页“分子运输车”——运载体的相关内容，填写下表 自主学习 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 1）作为运载工具，将目的基因导入受体细胞中 2）在受体细胞内对目的基因进行大量复制 ①细菌的质粒 ②病毒：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 项目 内容 作用 具备 条件 种类 质粒 将外源基因送入受体细胞 ④具有特殊的标记基因，便于进行筛选； 质粒、噬菌体和动植物病毒 存在于细菌及酵母菌等微生物中， 核DNA以外能自我复制的小型环状DNA分子 ①对受体细胞无害 ②具有多个限制酶切点，以便与外源基因插入其中； ③能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 载体能对受体细胞有害吗？ 载体怎样才能具有能连接不同目的基因的潜能呢？ 目的基因怎样才能在受体细胞分裂时不被丢失从而稳定地存在于子细胞内， 同时获得更多所需要的产品呢？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，现在还不清楚原因，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？ 不是的。实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备所需的4个条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 基因工程三工具 分子手术刀 限制（性内切）酶 分子缝合针 DNA连接酶 分子运输车 质粒、病毒等 基因的“剪刀” 基因的“针线” 基因的运载体 1.基因工程的正确操作步骤是（ ） ①使目的基因与运载体结合 ③检测与表达 ②将目的基因导入受体细胞 ④提取目的基因 A.③②④① B. ②④①③ C. ④①②③ D. ③④①② C 2.以下说法正确的是 ( ) A.目的基因是指重组DNA  B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.DNA重组所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 D.只要受体细胞中含有目的基因，目的基因就一定能成功表达 B 4