4D1基因的原位表达分析 毕业论文.doc

4D1基因的原位表达分析 摘要 褐飞虱是一种重要水稻害虫，基因4D1是褐飞虱取食抗性水稻B5及感虫水稻TN1后，差异表达的褐飞虱唾液腺基因，Blastx对4D1进行蛋白序列比对，结果显示与TonB依赖的受体蛋白有部分相似。因此，本研究运用石蜡包埋切片技术和DIG标记RNA探针的原位杂交技术对4D1进行了初步定位，结果显示在背血管周围的围心组织、脂肪组织等有较强杂交信号。本研究结果将为进一步分析基因4D1的功能奠定基础。 关键词 褐飞虱；石蜡切片；原位杂交 Localization of Gene 4D1 by RNA in Situ Hybridization Summertime School of life science, Guangzhou University ABSTRACT Brown planthopper(BPH) is an important rice damaging pest. The gene of 4D1,which is differentially expressed in BPH saliva gland when fed the BPH resistant rive variety B5 and susceptible variety TN1, was alaigned by Blastx, the result showed that 4D1 protein sequence had partial similarity with TonB-dependent receptor. Then the expression localization was performed using the techniques of paraffin-embedded sections and RNA in situ hybridyzation labled by DIG. The signals of hybridization were observed in the tissues around the dorsal vessel, and the fat bodies. The results of this study would lay a foundation for further analysing the function of the gene 4D1. KEY WORDS Brown planthopper(BPH)； paraffin-embedded sections； in situ hybridyzation 目录 1前 言 1 1.1水稻与褐飞虱 1 1.2组织原位杂交技术 2 1.3进展与意义 3 2材料与方法 4 2.1供试材料 4 2.1.1供试水稻、昆虫、4D1基因、载体与菌株 4 2.1.2相关试剂 4 2.1.3相关设备 6 2.2实验方法 6 2.2.1探针的制备 6 2.2.2褐飞虱的包埋处理 8 2.2.3石蜡切片 8 2.2.4杂交操作 9 3结果分析 10 3.1 基因4D1的序列。 10 3.2使用Blastx搜索结果。 11 3.3质粒提取结果 11 3.4酶切结果。 11 3.5原位杂交结果 12 4讨 论 14 4.1水稻与褐飞虱互作关系 14 4.2 TonB依赖的受体蛋白 15 参考文献 16 1前 言 1.1水稻与褐飞虱 粮食安全问题是新世纪全球面临的突出问题之一。水稻作为全世界过半人口的主粮，对世界粮食安全有着举足轻重的作用。有许多国家和地区的研究人员水稻做了大量研究。在中国，水稻同样有着重要地位。水稻研究的两个方向，一是增产，一是避灾。影响水稻生产安全的许多因素中，褐飞虱是一种重要的生物因素。 褐飞虱属同翅目飞虱科3H标记病毒RNA放射自显影技术metabolites控制的代谢组[13]。褐飞虱的刺吸行为表现出抑制植物的防御反应，造成这一现象目前普遍认为是由唾液腺中的激发子激发所产生的[12,14]，在同为刺吸式昆虫的蚜虫研究中，已经分离到几个激发子，而在褐飞虱中，还没有确切的唾液腺激发子报道。我们的研究意在确定唾液腺来源的基因4D1的表达部位，为将来探讨其是否为激发子奠定基础。 2材料与方法 2.1供试材料 2.1.1供试水稻、昆虫、4D1基因、载体与菌株 本研究中的褐飞虱均由广东省农业科学院提供，将成虫饲养于TN1水稻（室温，自然光照下培养），繁衍子代后，等子代长为成虫，进行石蜡包埋。 使用的基因4D1是由王小兰老师从取食水稻的褐飞虱唾液腺经SSH文库的构建、筛选而得到，碱基序列见结果部分。 目的的基因的载体是pGEM-T Easy，其结构如图1所示，该载体包含一个ScaI位点。质粒载体扩增所用的菌