【创新设计】高考生物总复习x基因工程及其安全性含生物武器课件解析.ppt

第1讲　基因工程及其安全性(含生物武器) 2015备考·最新考纲 1．基因工程的诞生(Ⅰ)。　2.基因工程的原理及技术(Ⅱ)。　3.基因工程的应用(Ⅱ)。　4.蛋白质工程(Ⅰ)。　5.转基因生物的安全性(Ⅰ)。　6.生物武器对人类的威胁(Ⅰ)。 1．基因工程的概念 (2)DNA连接酶 ②对载体的分析 思考感悟 限制酶为何不切割其所在生物自身的DNA? 提示　限制酶不切割原核生物自身DNA的原因：原核生物DNA序列中不存在该酶的识别位点或识别序列已经被修饰。 1．(2012·全国新课标，40)根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________________。 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。 (4)反转录作用的模板是________，产物是 __________________________________________________。 若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。 (5)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是__________________________________________________。 答案　(1)平末端　黏性末端　(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同　(3)T4　E·coli　(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR(聚合酶链式反应)　(5)动植物病毒　λ噬菌体的衍生物　(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱 2．(江苏卷，2T)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是__________________________________________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 _________________________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 解析　本题综合考查基因工程的过程及应用。(1)质粒是双链环状DNA分子，在Sma Ⅰ切割前没有游离的磷酸基团，Sma Ⅰ作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键，切割产生的DNA片段末端是平末端，因而质粒经切割后含有2个游离的磷酸基团。(2)质粒的热稳定性主要由氢键的数量决定，氢键数量越多，质粒的热稳定性越高，反之则低，DNA双链中A与T之间存在2个氢键，C与G之间存在3个氢键，因此DNA分子中G—C碱基对越多，热稳定性就越高，Sma Ⅰ识别CCCGGG序列，并在C和G之间将这段序列切开，也就是质粒中Sma Ⅰ酶切位点越多，G—C碱基对越多，热稳定性越高。 (3)据图1可知，Sma Ⅰ切割的位点在抗生素抗性基因之中，抗生素抗性基因是标记基因，应尽量避免破坏，据图2可知Sma Ⅰ切割的位点在目的基因之中，破坏了目的基因，所以不能使用Sma Ⅰ切割。(4)用同种限制酶切割后的质粒和目的基因，在基因表达载体构建时，常形成三种连接方式，其中目的基因与目的基因的连接、质粒与质粒的连接是无效的连接，用两种限制酶可避免此类现象。 (5)基因表达载体的构建过程中需加DNA连接酶，连接脱氧核糖和磷酸。 (6)抗生素抗性基因属于标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(7)目的基因是蔗糖转运