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第３６卷第１９期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．１９ ２０１４年１０月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　 Ｏｃｔ．１５　２０１４ １９８１ 文章编号：１０００５４０４（２０１４）１９１９８１０６ 论著 ｐｒｏＢＤＮＦ对培养鼠小脑颗粒细胞增殖和凋亡的影响 陈　甲，张　涛，刘　娟，蒋晓江，许志强　　（４０００４２重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科） 　　［摘要］　目的　观察脑源性神经营养因子前体（ｐｒｏＢＤＮＦ）对培养的小鼠小脑颗粒细胞（ＣＧＣｓ）的增殖和凋亡的影 响，探讨ｐ７５神经营养因子受体（ｐ７５ＮＴＲ）和ＶＰＳ１０Ｐ结构域家族成员ｓｏｒｔｉｌｉｎ的介导机制。方法　 采用出生后７ｄ（Ｐ７） ＋／＋ －／－ 的１２９ＳＶ转基因小鼠（ｐ７５ＮＴＲ 和ｐ７５ＮＴＲ ）进行 ＣＧＣｓ的原代培养。分为 ＢＳＡ组（１０ｎｇ／ｍＬ）、ｐｒｏＢＤＮＦ干预组 （１０ｎｇ／ｍＬ）和ｐｒｏＢＤＮＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）＋ｓｏｒｔｉｌｉｎＦｃ（２０ｎｇ／ｍＬ）干预组。免疫荧光染色法观察ｐ７５ＮＴＲ和ｓｏｒｔｉｌｉｎ在培养细胞 的表达，ＢｒｄＵ标记阳性增殖细胞以及ＴＵＮＥＬ法检测凋亡细胞。结果　 成功培养出高纯度的原代小脑颗粒细胞。免疫 荧光显示ｐ７５ＮＴＲ和ｓｏｒｔｉｌｉｎ共同表达于野生型小鼠培养的小脑神经元胞膜和突起上。给予ｐｒｏＢＤＮＦ干预后，ｐ７５ＮＴＲ＋／＋ 型ＣＧＣｓ的ＢｒｄＵ阳性细胞比例较对照组明显减少（Ｐ＜０．０１），而ＴＵＮＥＬ阳性细胞比例较对照组明显增加（Ｐ＜０．０１），且 －／－ 这两种效应都可被ｓｏｒｔｉｌｉｎＦｃ竞争性抑制并中和；ｐ７５ＮＴＲ 型ＣＧＣｓ中各组之间ＢｒｄＵ阳性细胞以及ＴＵＮＥＬ阳性细胞比 例均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论　 ｐｒｏＢＤＮＦ可能通过与ｐ７５ＮＴＲ、ｓｏｒｔｉｌｉｎ结合形成功能三聚体抑制神经细胞的增殖、 促进细胞凋亡，ｐｒｏＢＤＮＦ具有神经毒性作用。 　　［关键词］　 脑源性神经营养因子前体；小脑颗粒细胞；增殖；凋亡 　　［中图法分类号］　Ｒ３２２．８１；Ｒ３２９．２８；Ｒ３４１　　 ［文献标志码］　Ａ ｐｒｏＢＤＮＦｉｎｈｉｂｉｔｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｒｅｂｅｌｌａｒｇｒａｎｕｌｅｃｅｌｌｓ ＣｈｅｎＪｉａ，ＺｈａｎｇＴａｏ，ＬｉｕＪｕａｎ，ＪｉａｎｇＸｉａｏｊｉａｎｇ，ＸｕＺｈｉｑｉａｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｒｇｅｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｄａｐｉｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００４２，Ｃｈｉｎａ） 　　 ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｂｒａｉｎｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒｐｒｅｃｕｒｓｏｒ （ｐｒｏＢＤＮＦ）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｒｅｂｅｌｌａｒｇｒａｎｕｌｅｃｅｌｌｓ（ＣＧＣｓ）ａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆｐ７５ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ（ｐ７５ＮＴＲ）／ＶＰＳ１０Ｐｄｏｍａｉｎｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒｓｏｒｔｉｌｉｎ ＋／＋ ｐａｔｈｗａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＣＧＣｓｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ ７ｄａｙｏｌｄｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ１２９ＳＶ ｍｉｃｅ（ｐ７５ＮＴＲ ａｎｄ