湖南农业大学生物化学04-酶学-02酶促反应动力学_PDF转换成word转换器介绍.doc

第四章 酶学  第四章 酶学 第一节 酶通论 第二节 酶促反应动力学 第三节 酶的作用机制和酶的调节 第四节 酶工程简介  化学反应 化学反应有两个方面的基本问题： ?反应过程的能量效应，进行的方向和限度 ?反应进行的速率和反应机制。 化学热力学 化学动力学 热力学第一定律（能量守恒和转化定律）：化学反应中的热效应 热力学第二定律：化学反应的方向和限度，相平衡和化学平衡等 热力学第三定律：阐明绝对熵的数值（0K时,纯物质完美晶格固体 的熵为0）  酶促反应动力学 ? 酶促反应动力学 研究各种因素对酶促反应速度的影响。 ? 影响因素包括有 底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。  第二节 酶促反应动力学 一、化学动力学基础 ⊙ 二、底物浓度对酶反应速率的影响 ⊙ 三、酶的抑制作用 四、温度对酶反应的影响 五、pH对酶反应的影响 六、激活剂对酶反应的影响 ⊙ ⊙ ⊙ ⊙ Home  一、化学动力学基础 （一）反应速率及其测定 ⊙ （二）反应分子数、反应级数、各级反应的特征 ⊙  （一）反应速率及其测定 反应速率：以单位时间内反应物 或 生成物浓度的改变来表示 反应速率的测定：测定不同时间内反应物 或 生成物的浓度 C 生成物 物 质 浓 度 反应物 t 反应时间  （二）反应分子数和反应级数 1、反应分子数：反应中真正相互作用的分子的数目。 单分子反应、双分子反应、3分子反应 4分子反应？没有被发现过 2、反应级数与各级反应的特征： 根据实验结果，整个化学反应的速率服从哪种分子反 应速率方程式，则这个反应为几级反应。 一级反应：反应速率只与反应物浓度的一次方成正比的 反应称为一级反应。 v=kc 反应速率常数k的单位：S -1 二级反应：反应速率与反应物浓度的二次方（或两种物质 浓度的乘积）成正比 v=kc1c2 -1 k的单位：mol · L · S -1 零级反应：反应速率与反应物浓度无关，而受其他因素影 v=k 响而改变。 k的单位：mol · L-1 · S-1 Back  二、底物浓度对酶反应速率的影响 （一）中间络合物学说 ⊙ （二）酶促反应动力学方程式 ⊙ Back  （一）中间络合物学说 1903年，Henri和Wurtz提出“酶底物中间络合物学说” 亦称“中间产物学说” k1 k3 + + P E S ES E k2 Henri用蔗糖酶水解蔗糖，得到双曲线 v Vmax 零级反应 混合级反应 一级反应 [S] 底物浓度对酶催化反应初速率的影响  底物浓度对反应初速率的影响 一级反应： 底物浓度很小时，酶没有被底物饱和，此时，反应速 率取决于底物浓度。 零级反应： 底物浓度相当高时，溶液中的酶全部被底物饱和，溶 液中没有多余的酶，即使增加底物浓度也不会产生更多的中间 复合物，此时，反应速率与底物无关，达到最大反应速率。  中间络合物学说的实验证据 1、超离心沉降时，可观察到酶和底物共沉淀的现象； 2、酶的物理性质如溶解度、热稳定性，在形成ES复合物后 会发生变化； 3、酶和底物的光谱特性在形成ES后发生变化； 4、ES复合物已经被电子显微镜和X射线晶体结构分析直接 观察到； 5、已经分离得到某些酶与底物相互作用生成的ES复合物。  色氨酸合成酶的荧光强度随底物的加入而改变 Ser + 吲哚 Trp 无底物的酶 （含辅基磷酸吡哆醛） 酶 酶 —Ser 加入Ser后 荧 光 强 度 吲 哚 再加入吲哚 450 500 550 Back  （二）酶促反应动力学方程式 1、米氏方程的推导 ⊙ 2、动力学参数的意义 ⊙ 3、利用作图法测定 Km和 Vmax值 ⊙ Back  1、米氏方程的推导 说明：整个反应中，底物浓度与反应速度的关系 k1 k2 k3 E + S E + P ES 依据：中间产物学说 E — enzyme酶, S — Substrate底物, P — Product产物 k1, k2, k3 —相应反应的速率常数 v1 = k1 [E] [S] v2 = k2 [ES] + k3 [ES] ES生成速度： ES分解速度： 4个假设: （1） E与S形成ES的反应是快速平衡反应，而 ES分解为E及P 的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 v＝ k3[ES]。 （2）底物浓度远远大于酶浓度，即[S]＞＞ [E] k （3）反应初速率阶段，P浓度极小，忽略 E+P 4 ES反应 （4）稳态假设：反应进行的一定的时间内，尽管底物浓度与 产物浓度在不断地变化，ES也在不断地合成与分解，但其生 成的速率与其分解的速率相等，ES的浓度保持不